可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 马铃薯种薯与商品薯 | 产地检疫、调运检疫、入库验收、出口前核查 | 块茎肿瘤症状核查、芽眼部位切片镜检、休眠孢子囊形态鉴定、内转录间隔区分子检测 | GB 7331-2003《马铃薯种薯产地检疫规程》、GB 18133-2012《马铃薯种薯》、EPPO PM 7/28 诊断协议 |
| 田间疑似病株与肿瘤组织 | 产地疫情普查、疑似病例确诊、防控效果评价 | 花椰菜状肿瘤形态核查、病组织压片镜检、夏孢子堆与休眠孢子囊鉴别、致病性确认 | 显微形态学鉴定结合分子验证，按 EPPO PM 7/28 执行 |
| 产地土壤与病田土样 | 疫区土壤带菌评估、轮作与休耕地监测、复垦前基线调查 | 休眠孢子囊富集计数、孢子囊存活状态判定、土壤带菌量分级 | 湿筛漂洗结合密度梯度离心富集，显微计数 |
| 脱毒种薯各级别材料 | 原原种、原种、大田用种级别检验与繁育体系健康核查 | 病菌筛查、级别符合性检验、真实性与纯度分子标记 | GB/T 29377-2026《马铃薯脱毒种薯级别与检验规程》、GB/T 28660-2012（SSR分子标记法） |
| 进境与跨区调运繁殖材料 | 口岸检疫查验、隔离试种期间监测、引种审批技术支撑 | 检疫性有害生物针对性检测、症状与潜伏侵染排查、试种期跟踪复核 | 进境植物检疫性有害生物名录、GB 7331-2003 |
| 组培脱毒试管苗 | 茎尖脱毒培养物放行前核查、基础种源健康评价 | 带菌筛查、脱毒效果确认、品种真实性验证 | 分子检测结合组培苗形态核查 |
| 疫情复核样品 | 基层初筛阳性复核、防控验收、疫区解除评估 | 形态学复核、分子复检、小种分型补充鉴定 | 形态与分子双指标复核判定 |
检测项目
1. 症状与形态学鉴定：核查块茎芽眼及茎基部花椰菜状肿瘤，镜检休眠孢子囊形态，壁厚、金黄褐色，直径40至80微米，放大1000倍油镜观察。
2. 土壤带菌检测：密度梯度离心结合湿筛富集休眠孢子囊，显微计数，方法灵敏度可达每克风干土1个孢子囊。
3. 分子检测：基于核糖体内转录间隔区设计引物，普通聚合酶链式反应与实时荧光定量检测并行，判读扩增曲线并测序比对确认。
4. 生理小种鉴定：采用鉴别马铃薯品种系列接种测定，按国际通用小种命名区分G1、G2等致病型，指导抗病品种布局。
5. 产地疫情监测：田间发病率普查与病田边界划定，评估休眠孢子囊在土壤中30年以上的存活风险，支撑疫区管理与轮作决策。
检测范围
1. 马铃薯种薯：原原种、原种、大田用种各级别块茎。
2. 商品薯与加工薯：收储、调运及出口批次的块茎样品。
3. 田间病组织：肿瘤组织、茎基部、匍匐茎等发病部位。
4. 土壤样品：疫区耕层土壤、病田周边土样及轮作地土样。
5. 繁殖材料：脱毒试管苗、组培苗及进境引种材料。
检测方法
1. GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程：规定田间普查、抽样与产地检疫程序。
2. GB 18133-2012 马铃薯种薯：规定种薯质量分级与健康要求。
3. GB/T 28660-2012 马铃薯种薯真实性和纯度鉴定 SSR分子标记：DNA水平鉴定种薯遗传真实性。
4. GB/T 29377-2026 马铃薯脱毒种薯级别与检验规程：规定脱毒种薯各级别检验项目与判定。
5. EPPO PM 7/28 马铃薯癌肿病菌诊断协议：涵盖形态学鉴定、分子检测与小种鉴定的国际规程。
检测设备
1. 正置生物显微镜：配油镜与目镜测微尺，最大放大倍率1000倍，用于休眠孢子囊形态观察与测径。
2. 体视显微镜：变焦范围7至45倍，用于肿瘤组织挑取与病组织初步剖检。
3. 实时荧光定量PCR仪：96孔半导体模块，温度范围4至99℃，升降温速率每秒6℃。
4. 梯度PCR仪：温度精度0.1℃，支持退火温度梯度优化。
5. 凝胶成像系统：蓝光与紫外双光源，配16位制冷相机，用于扩增产物判读。
6. 高速冷冻离心机：最大转速15000转每分钟，温控4℃，用于密度梯度离心富集孢子囊。
7. 恒温金属浴：控温室温至99℃，精度0.2℃，用于恒温扩增与样品前处理保温。
8. 往复振荡器：转速30至300转每分钟，用于土壤样品充分悬浮分散。
9. 超净工作台：垂直层流，洁净度百级，用于核酸提取与反应体系配制。
10. 人工气候箱：温度10至35℃，湿度控制达90%以上，用于鉴别品种接种后发病观察。