检测项目

酶活性检测：

• 基础催化活性：泛素转移速率（≥0.5 μmol/min/mg，参照ISO 18185）
• ATP依赖性：水解效率（ATP消耗量≥80%）
• 酶稳定性：半衰期（t1/2≥30 min）

• 米氏常数：Km值（范围0.1-10 μM）
• 最大反应速率：Vmax（≥100 nmol/s）
• 催化效率：kcat/Km比值（≥10^4 M^{-1}s^{-1}）

• 泛素结合亲和力：Kd值（≤1 μM）
• 异泛素化响应：交叉反应率（≤5%）
• 底物选择性：IC50值（针对特定突变体）

• 抑制剂效力：IC50（≤10 μM）
• 结合常数：Ki值（精确至±0.1 μM）
• 时间依赖性抑制：kinact/KI比值（≥100 M^{-1}s^{-1}）

• 变性温度：Tm值（≥40°C）
• 热诱导聚集：浊度变化（ΔOD≤0.1）
• 复性效率：活性恢复率（≥90%）

• 最适pH范围：活性峰值（pH 7.0-7.5）
• 酸碱稳定性：残余活性（≥80% at pH 6-8）
• 缓冲液影响：离子强度效应（±5%偏差）

• Mg^{2+}依赖性：激活阈值（≥1 mM）
• 重金属抑制：Zn^{2+} IC50（≤50 μM）
• 离子选择性：相对活性比（Ca^{2+}/Mg^{2+}≤0.8）

• 绝对浓度：质量精度（±0.01 mg/mL）
• 纯度验证：杂质含量（≤0.1%）
• 活性单位定义：U/mg（参照GB/T 16886）

• 二级结构占比：α-螺旋含量（≥40%）
• 动态折叠：荧光猝灭率（ΔF/F0≤0.2）
• 聚集状态：粒径分布（D90≤10 nm）

• 癌症标志物表达：上调倍数（≥2-fold）
• 神经退行性关联：活性损失率（≤20%）
• 药物靶点验证：EC50值（精确至±0.5 μM）

检测范围

1. 重组泛素活化酶蛋白： 涵盖原核/真核表达系统，重点检测纯化后活性保留及批次一致性

2. 细胞裂解物样本： 包括HEK293/HeLa细胞系，侧重内源性酶活性定量及污染物干扰排除

3. 组织匀浆： 涉及肝/脑器官样本，检测重点为病理状态下的酶表达差异及基质效应校正

4. 血清样本： 适用于临床诊断，重点监测循环酶水平与疾病相关性及抗干扰能力

5. 纯化酶制剂： 针对商业酶产品，检测重点包括储存稳定性验证及赋形剂影响评估

6. 转基因细胞系： 涵盖CRISPR编辑模型，侧重突变体酶功能缺失或增益分析

7. 临床活检样本： 如肿瘤组织，重点检测局部酶活性异常及样本处理标准化

8. 药物筛选库： 包括小分子化合物，检测重点为高通量抑制剂筛选及假阳性控制

9. 环境污染物暴露样本： 如重金属处理细胞，侧重酶抑制效应及剂量响应曲线

10. 基因编辑模型： 如动物组织，重点验证基因敲除/过表达后的酶动力学变化

检测方法

国际标准：

• ISO 10993-5:2021 生物材料酶活性测试方法
• ASTM E2520-18 酶动力学参数测定规程
• ISO 17025:2017 检测实验室通用要求
• OECD TG 471 体外抑制剂筛选指南
• IUPAC 酶学委员会标准方法

• GB/T 16886.1-2022 医疗器械生物学评价
• GB/T 5009.9-2023 食品中酶活性测定
• GB/T 33433-2016 蛋白质稳定性检测方法
• GB/T 35820-2018 临床样本酶学分析
• GB/T 27401-2008 实验室质量控制规范

检测设备

1. 荧光分光光度计： Hitachi F-7100型（波长范围200-900 nm，精度±0.1 nm）

2. 高效液相色谱仪： Agilent 1260 Infinity II（流速0.1-10 mL/min，检测限0.01 μg/mL）

3. 质谱仪： Thermo Q Exactive HF-X（分辨率240,000，质量精度±0.5 ppm）

4. 酶标仪： BioTek Synergy H1（动态范围0-4 OD，温控精度±0.1°C）

5. 等温滴定量热仪： MicroCal PEAQ-ITC（热功率分辨率0.1 μJ/s）

6. 圆二色谱仪： Jasco J-1500（光谱范围170-800 nm，信噪比≥1000:1）

7. 表面等离子体共振仪： Biacore 8K（检测限1 RU，流速范围1-100 μL/min）

8. 核磁共振仪： Bruker Avance NEO 600 MHz（场强14.1 T，灵敏度≥1000:1）

9. 电泳系统： Bio-Rad Mini-PROTEAN Tetra（电压范围10-500 V，凝胶尺寸8x10 cm）

10. 离心机： Eppendorf 5430 R（最大转速30,000 rpm，温控±0.5°C）

11. 恒温振荡器： Thermo MaxQ 4000（温度范围4-80°C，振荡频率0-300 rpm）

12. 显微镜： Olympus IX83（放大倍数40-1000x，分辨率0.2 μm）

13. PCR仪： Applied Biosystems VeritiPro（温控精度±0.1°C，升降温速率5°C/s）

14. 细胞培养箱： Thermo Heracell VIOS（CO2控制±0.1%，湿度≥95%）

15. 生物反应器： Sartorius Biostat STR（体积范围1-10 L，pH控制±0.05）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

　　以上是与泛素活化酶检测相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。