检测项目
理化特性检测：
- 电荷异质性：等电点（pI 6.8-8.2）、酸性/碱性峰比例（参照USP<129>）
- 分子量测定：完整分子量（误差≤50Da）、轻/重链比例（1:1±0.1）
- 疏水性：HIC-HPLC保留时间（RSD≤2%）
- 细胞杀伤效价：EC50值（报告单位ng/mL，偏差≤20%）
- 受体结合力：KD值（SPR检测，≤10nM）
- Fc功能：ADCC/CDC活性（效价≥标示量80%）
- 高分子聚集体：SEC-HPLC（≤3.0%，USP<621>）
- 宿主细胞蛋白：ELISA（≤100ppm，参照EP 2.6.34）
- DNA残留：qPCR（≤10ng/剂）
- N-糖谱：G0F/G2F占比（HILIC-UPLC，主糖型≥60%）
- 唾液酸含量：≤2 mol/mol（WB-FACE法）
- 甘露糖化：高甘露糖型（≤15%）
- 二硫键配对：LC-MS/MS（配对正确率≥95%）
- 肽图分析：胰酶消化相似度（≥90%）
- 游离巯基：Ellman法（≤2个/分子）
- 亚可见颗粒：≥10μm（≤6000粒/瓶，USP<788>）
- 可见异物：目视检查（无可见颗粒）
- 强制降解：氧化/脱酰胺变异体（≤5%增量）
- 片段化：CE-SDS（非还原模式，主峰≥90%）
- 渗透压：290±30 mOsm/kg（冰点法）
- 可见色泽：符合YP≤5标准（药典通则0901）
- 内毒素：＜0.5EU/mg（动态显色法）
- 无菌检查：膜过滤法（符合EP 2.6.1）
- Protein A-HPLC：浓度精度（RSD≤5%）
- UV280法：消光系数（1.4-1.6 mL/mg·cm）
检测范围
1. IgG1/IgG4治疗抗体： 重点检测FcγRIIIa结合活性及补体C1q位点完整性
2. ADC药物： 聚焦药物抗体比（DAR值，范围2.0-4.0）及小分子毒素游离率（≤5%）
3. 双特异性抗体： 强制要求交叉结合活性验证及错配体检测（CEX-HPLC）
4. 抗体片段： Fab/scFv需额外测定半衰期（SPR分析FcRn结合力）
5. 融合蛋白： 侧重受体结构域功能活性（如TNF-α中和效价）
6. 长效修饰抗体： 重点分析PEG化程度（MALDI-TOF）及修饰位点分布
7. 眼科用抗体： 增加亚微米颗粒检测（≥2μm颗粒≤1000/剂）
8. 冻干制剂： 复溶时间（≤3分钟）及水分含量（≤3.0%，卡尔费休法）
9. 预充式注射剂： 硅油滴释放量（≤10,000粒/毫升，流式成像法）
10. 生物类似药： 强制进行正交质量属性对比（主成分相似性≥98%）
检测方法
国际标准：
- USP<129> 蛋白质药物电荷异质性分析
- EP 2.7.1 生物学活性检测通则
- ICH Q6B 质量标准制定规范
- ISO 10993-5 体外细胞毒性试验
- 《中国药典》2020版 三部 生物制品通则
- GB/T 34818-2017 抗体药物糖基化分析指南
- YY/T 1611-2018 治疗性抗体效价测定法
检测设备
1. UPLC-HRMS系统： Thermo Q Exactive HF-X（分辨率240,000，质量精度<1ppm）
2. 毛细管电泳仪： Beckman PA 800 Plus（电压范围0-30kV，温控精度±0.1℃）
3. 表面等离子共振仪： Biacore 8K（检测限0.1pg/mm²，流速范围1-100μL/min）
4. 分子互作分析仪： Octet RED384（同时检测8通道，KD值范围10mM-1pM）
5. 成像流式细胞仪： Amnis ImageStreamX MkII（60倍物镜，6通道同步成像）
6. 糖分析UPLC： Waters ACQUITY UPLC H-Class（荧光检测器灵敏度0.01nmol）
7. 自动化Western系统： ProteinSimple Jess（毛细管分离，检测限0.5pg）
8. 亚可见颗粒计数器： FlowCam 8000系列（检测粒径1-300μm，通量1mL/min）
9. 圆二色谱仪： Chirascan V100（波长范围165-280nm，温控±0.02℃）
10. 微量热泳动仪： NanoTemper Monolith（样品量4μL，KD值范围1mM-1pM）
11. 高内涵成像系统： PerkinElmer Opera Phenix（水镜60×NA1.1，Z轴分辨率0.5μm）
12. 冷冻电镜： Thermo Glacios（加速电压200kV，分辨率0.2nm）
13. 激光衍射粒度仪： Malvern Mastersizer 3000（测量范围0.01-3500μm）
14. 多功能酶标仪： BMG CLARIOstar（动态范围6个数量级，温控精度±0.2℃）
15. 自动化移液平台： Hamilton Microlab STAR（移液精度CV≤0.5%，通量96孔/秒）