检测项目

样品采集处理：

• 采样体积：≥200μL（参照WHO指南）
• 保存条件：-80°C冷冻，缓冲液pH值7.0-7.4

• 提取效率：回收率≥90%
• 纯度指标：A260/A280比值1.8-2.0，残留抑制剂≤5%

• 循环次数：35-45cycles，退火温度55-65°C
• 引物设计：Tm值55-65°C，特异性结合位点≥18bp

• 阈值循环（Ct值）：≤40，动态范围10^1-10^7copies/μL
• 荧光强度：信噪比≥10：1

• 内参基因：GAPDH或RNasePCt值18-22
• 阴性对照：无扩增信号，阳性对照Ct值25-30

• 标准曲线R²≥0.99，斜率-3.3至-3.5
• 检测限：≤100copies/mL

• 测序深度：≥100x覆盖率
• 突变位点检测：灵敏度≥95%

• 特异性：与相似病毒株无扩增，假阳性率≤1%

• 样本稳定性：室温保存≤24h，-20°C保存≥7天

• 低拷贝检测：极限检测10copies/reaction

检测范围

1.呼吸道样本：咽拭子、鼻拭子，重点检测病毒载量动态变化和早期感染识别

2.血液样本：血清、血浆，侧重病毒血症定量和抗体干扰排除

3.环境样本：废水、物体表面拭子，监控社区传播，重点富集低浓度病毒

4.食品样本：肉类、蔬菜表面，预防食源传播，检测病毒存活率和灭活效果

5.空气样本：气溶胶过滤器，评估空气传播风险，侧重采样效率≥80%

6.动物样本：家禽、啮齿动物组织，监测人畜共患病，重点跨物种传播分析

7.植物样本：叶片、根系，研究植物载体作用，检测病毒RNA稳定性

8.医疗器械：拭子、导管，确保无菌操作，重点残留核酸清除验证

9.生物制品：疫苗、细胞培养液，质量控制病毒污染，灵敏度≤10IU/mL

10.研究样本：细胞系、组织切片，支持基础研究，侧重基因组完整性和逆转录效率

检测方法

国际标准：

• ISO15216-1:2017食品和环境中病毒检测方法
• WHOEPI-LAMP-002现场核酸扩增技术指南

• GB/T37871-2019新型冠状病毒核酸检测方法
• YY/T1717-2020体外诊断试剂核酸提取纯化

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：QuantStudio5型（温度范围4-99°C，精度±0.1°C）

2.核酸自动提取仪：KingFisherFlex型（通量96样本/次，提取时间≤30min）

3.高速离心机：Eppendorf5430R型（转速30000rpm，最大RCF30000xg）

4.紫外分光光度计：NanoDropOne型（检测范围2-15000ng/μL，波长260nm）

5.电泳系统：Bio-RadMini-PROTEAN型（电压100-300V，凝胶浓度1-2%）

6.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000型（通量20Tb/run，读长2x150bp）

7.生物安全柜：ESCOA2型（风速0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

8.恒温混匀仪：ThermoMixerC型（温度范围-10-99°C，振荡频率300-1500rpm）

9.自动移液工作站：HamiltonSTARlet型（精度±0.5μL，移液范围1-1000μL）

10.低温存储箱：HaierDW-86L338型（温度-86°C，容量338L）

11.荧光显微镜：OlympusBX53型（放大倍数40-1000x，光源LED）

12.数据采集软件：QuantStudioDesign&Analysis2.0（分析模块Ct值计算，误差率≤0.5%）

13.真空浓缩仪：MiVacQuattro型（蒸发速率1mL/min，温度控制30-60°C）

14.震荡孵育器：EppendorfThermoShaker型（温度范围4-99°C，振幅3mm）

15.纯水系统：Milli-QIntegral型（电阻率