细胞氧化应激检测

检测项目

活性氧(ROS)水平检测：测量细胞内超氧阴离子、过氧化氢等浓度，检测范围10⁻⁹~10⁻⁶M，灵敏度0.1nM（基于荧光探针法）

超氧化物歧化酶(SOD)活性测定：评估酶清除超氧自由基效率，单位U/mg蛋白，检测精度±5%（分光光度法）

过氧化氢酶(CAT)活性测定：量化分解过氧化氢能力，单位katal/g，线性范围0.1~100katal（紫外分光光度法）

谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性测定：测定还原过氧化物酶活，单位nmol/min/mg，检测限0.01nmol（NADPH消耗法）

丙二醛(MDA)含量测定：检测脂质过氧化终产物，灵敏度0.1μM，范围0.1~100μM（硫代巴比妥酸反应法TBARS）

蛋白质羰基含量测定：评估蛋白质氧化损伤，检测限0.1nmol/mg蛋白，精度±3%（DNPH衍生化法）

8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)检测：量化DNA氧化损伤标志物，精确度±5%，范围0.1~100ng/mL（ELISA或HPLC法）

谷胱甘肽(GSH/GSSG)比例测定：评估氧化还原状态，比率范围0.1~10，检测灵敏度0.01μM（高效液相色谱法HPLC）

总抗氧化能力(T-AOC)测定：综合评估抗氧化潜力，单位mmolTrolox等效，范围0.01~10mmol（FRAP或ORAC法）

线粒体膜电位检测：量化线粒体功能状态，使用JC-1探针比率，检测范围50~500mV（流式细胞术）

一氧化氮(NO)水平检测：测定细胞内NO生成，范围1~100μM，精度±2%（Griess试剂法）

抗氧化酶基因表达分析：评估SOD、CAT等转录水平，Ct值范围10~40（实时荧光定量PCR）

硫氧还蛋白还原酶活性测定：检测酶还原能力，单位mU/mg，灵敏度0.05mU（酶动力学法）

细胞凋亡相关氧化标志物检测：包括Caspase-3活性，范围0.01~1U（荧光底物法）

过氧化脂质氢过氧化物测定：量化初级氧化产物，检测限0.05μM，范围0.1~50μM（FOX试剂法）

检测范围

哺乳动物培养细胞系：如HEK293、HeLa、MCF-7等上皮和癌细胞，用于基础研究

动物组织样本：包括肝脏、脑、心脏、肾脏等器官冻存或新鲜组织，适用于毒理学评估

人体血液样本：全血、血浆、血清用于临床氧化应激监测和疾病诊断

植物细胞和组织：如叶片、根尖用于环境胁迫（如重金属）响应研究

微生物细胞：细菌（如大肠杆菌）、酵母（如酿酒酵母）发酵液或培养物，用于工业应用

临床活检样本：肿瘤组织、炎症部位用于病理分析和治疗评估

原代细胞培养：如神经元、肝细胞分离培养，用于体外模型构建

组织切片：石蜡包埋或冰冻切片用于免疫组化和原位检测

生物流体样本：尿液、唾液、脑脊液非侵入性检测，适用于流行病学调查

环境生物样本：鱼鳃、藻类用于生态毒理学和水质监测

细胞器分离物：线粒体、微粒体亚细胞组分，用于机制研究

食品和营养样本：如蔬果提取物、膳食补充剂，用于抗氧化能力评价

药物筛选样本：化合物库处理细胞，用于新药开发毒性测试

昆虫和节肢动物组织：如果蝇、蜜蜂用于衰老和环境适应研究

海洋生物样本：珊瑚、贝类用于气候变化氧化应激响应

检测方法

荧光探针法测定细胞内ROS：使用DCFH-DA或DHE探针，细胞加载后荧光检测，依据ISO10993-5细胞毒性测试标准，激发/发射波长488/525nm

分光光度法测定SOD活性：基于抑制硝基蓝四唑还原反应，参照GB/T5009.124食品安全标准，波长560nm，反应时间30min

紫外分光光度法测定CAT活性：监测过氧化氢分解速率，符合ASTME2524抗氧化剂测试规范，波长240nm，温度25°C

酶联免疫吸附法(ELISA)测定8-OHdG：采用商业化试剂盒双抗体夹心法，依据ISO17025检测实验室要求，孵育时间2h，波长450nm

高效液相色谱法(HPLC)测定GSH和GSSG：使用反相C18柱分离，衍生化后UV检测，参照GB/T19648农药残留方法，流速1mL/min

硫代巴比妥酸反应法(TBARS)测定MDA：样本加热反应后比色测定，依据AOACOfficialMethod965.33，波长532nm，加热95°C60min

DNPH衍生化法测定蛋白质羰基：蛋白质衍生后分光光度检测，基于IUPAC国际标准，波长370nm，衍生化时间1h

流式细胞术分析线粒体膜电位：使用JC-1染料比率法，标准操作协议，激光波长488nm，发射波长530/590nm

Griess试剂法测定NO水平：亚硝酸盐比色测定，参照GB/T5750.10生活饮用水标准，波长540nm，反应时间10min

氧自由基吸收能力(ORAC)测定：荧光素衰减动力学法，依据USDA方法，激发485nm，发射520nm，温度37°C

铁还原抗氧化能力(FRAP)测定：TPTZ比色法，基于Benzie和Strain方法，波长593nm，反应时间4min

实时荧光定量PCR分析抗氧化基因：SYBRGreen法，循环条件95°C10s,60°C30s，依据MIQE指南

免疫印迹法检测氧化损伤蛋白：SDS-PAGE分离，一抗孵育，参照GB/T16886生物相容性标准，曝光时间1-5min

电化学法测定抗氧化剂浓度：玻碳电极安培检测，标准曲线法，范围0.1-100μM，依据ISO15193临床检验标准

质谱法分析氧化代谢产物：LC-MS/MS联用，多反应监测模式，碰撞能量10-30eV，参照FDA生物分析方法指南

检测设备

荧光分光光度计PerkinElmerLS55：激发波长200-750nm，发射波长200-800nm，用于ROS和荧光探针检测，分辨率0.5nm

多功能酶标仪BioTekSynergyH1：支持吸光度、荧光、发光模式，波长范围200-999nm，用于微孔板高通量分析

高效液相色谱仪Agilent1260InfinityII：配备二极管阵列检测器，流速范围0.001-10mL/min，用于GSH和氧化产物分离定量

流式细胞仪BDFACSCalibur：488nm激光源，四色荧光检测，前向/侧向散射，用于细胞氧化状态多参数分析

紫外-可见分光光度计ThermoScientificGENESYS150：波长范围190-1100nm，带宽1nm，用于酶活性和比色测定

倒置荧光显微镜OlympusIX73：LED光源，10×-100×物镜，CCD相机，用于活细胞动态成像和定位

实时荧光定量PCR仪AppliedBiosystems7500：温度梯度控制±0.1°C，多通道检测，用于氧化应激基因表达定量

高速冷冻离心机Eppendorf5430R：最大转速30,000rpm，温度范围-20°C至40°C，用于样本快速制备和分离

CO2培养箱ThermoScientificHeracell150i：温度控制±0.1°C，CO2浓度0-20%，用于细胞培养和维护

冷冻切片机LeicaCM1950：切片厚度1-100μm，温度范围-50°C至0°C，用于组织样本精密切片制备

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"细胞氧化应激检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。