ELISA效价试验

检测项目

抗体效价检测：

• 效价测定：最低检测限（LOD≤0.5ng/mL）、50%抑制浓度（IC50值）（参照CLSIEP17）
• 滴度分析：终点滴度（如≥1:1024）、半数有效浓度（EC50）（参照ISO15189）

抗原结合能力：

• 结合亲和力：解离常数（Kd≤10nM）、结合速率（ka≥1×10⁵M⁻¹s⁻¹）（参照FDA指南）
• 饱和结合：最大结合量（Bmax≥90%）、非特异性结合（NSB≤5%）

灵敏度测试：

• 检测限：LOD（≤0.1ng/mL）、定量限（LOQ≤1ng/mL）
• 动态范围：线性相关系数（R²≥0.98）、斜率偏差（±10%）

特异性测试：

• 交叉反应性：相关抗原干扰率（≤5%）、无关抗原抑制率（≥95%）
• 选择性：基质效应评估（回收率85-115%）（参照ICHQ2）

精密度检测：

• 批内精密度：变异系数（CV≤8%）、重复性标准偏差（SD≤0.5）
• 批间精密度：日间变异（CV≤12%）、中间精密度（参照EP05-A3）

准确性验证：

• 回收率测试：加标回收率（90-110%）、偏差值（±5%）
• 标准曲线拟合：残差平方和（RSS≤0.01）、拟合优度（≥0.95）

线性范围测定：

• 线性区间：浓度范围（1-1000ng/mL）、线性响应（斜率1.0±0.1）
• 稀释线性：系列稀释偏差（≤15%）、平行性评估（参照CLSIEP06）

稳定性评估：

• 试剂稳定性：冻融循环次数（≥5次）、储存温度影响（4°C下≥6个月）
• 样本稳定性：室温时效（≤24小时）、长期稳定性（-80°C下≥1年）

交叉反应性分析：

• 同源干扰：同型抗体抑制率（≤10%）、异嗜性抗体影响（参照FDA建议）
• 异源交叉：相似抗原反应性（≤3%）、特异性阈值（≥97%）

回收率测试：

• 样本回收：基质回收率（85-115%）、稀释回收率（90-110%）
• 干扰测试：内源物质影响（偏差±10%）、外源添加物评估（参照EP07）

检测范围

1.血清样本：涵盖人源或动物血清，检测重点为抗体效价定量和基质干扰评估。

2.血浆样本：包括肝素或EDTA抗凝血浆，侧重抗凝剂对效价测定的影响分析。

3.单克隆抗体：针对IgG或IgM类型，重点检测结合亲和力和批次一致性。

4.多克隆抗体：涉及多价抗体混合物，侧重特异性验证和交叉反应性测试。

5.疫苗样本：如灭活疫苗或重组蛋白疫苗，检测重点为免疫原性效价和稳定性。

6.诊断试剂盒：包括ELISA试剂盒成品，侧重性能参数验证和线性范围测定。

7.细胞培养上清：涵盖杂交瘤或CHO细胞上清，重点检测抗原表达水平和杂质干扰。

8.组织匀浆：如肿瘤或器官组织提取物，侧重样本均质化对效价准确性的影响。

9.尿液样本：用于非侵入性检测，检测重点为低浓度目标分子回收率和基质效应。

10.唾液样本：涉及口腔分泌物，侧重便捷采样下的精密度和稳定性评估。

检测方法

国际标准：

• ISO13485:2016医疗器械质量管理体系要求
• CLSIEP17-A2免疫测定性能评价协议
• ICHQ2(R1)分析方法验证文本
• FDAImmunogenicityTestingGuidance抗体检测指南

国家标准：

• GB/T19495.1-2004转基因产品检测方法
• GB/T5009.XX-201X食品中免疫学检测方法
• YY/T1244-2014体外诊断试剂稳定性评价
• GB/T16886.1-2011医疗器械生物学评价

方法差异说明：国际标准如ISO强调全程质量管理，而国家标准GB/T侧重具体操作参数如样本稀释比例；CLSIEP17要求精密度CV≤10%，GB/T等效标准允许CV≤15%；FDA指南注重临床相关性，GB/T更注重实验室重复性。

检测设备

1.微孔板阅读器：BioTekSynergyH1（波长范围200-999nm，检测精度±0.005OD）

2.自动洗板机：BioTekELx405（清洗次数1-10次可调，残留液量≤2μL）

3.多通道移液器：EppendorfResearchplus（通道数8-12，精度±1%，量程0.5-1000μL）

4.恒温培养箱：MemmertIN55（温度范围5-80°C，稳定性±0.5°C）

5.离心机：Eppendorf5424R（最大转速15000rpm，容量24×1.5mL）

6.酶标仪：ThermoMultiskanSkyHigh（灵敏度0.001OD，线性范围0-4OD）

7.振荡器：IKAMS3digital（转速50-1500rpm，振幅3mm）

8.纯水系统：MilliporeMilli-Q（电阻率≥18.2MΩ·cm，颗粒物≤1/mL）

9.冰箱：ThermoScientificTSX（温度范围-86至-20°C，均一性±2°C）

10.pH计：MettlerToledoSevenExcellence（精度±0.01pH，范围0-14）

11.电子天平：SartoriusCubisII（量程0.001g-220g，精度±0.0001g）

12.生物安全柜：EscoAirstream（风速0.3-0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

13.混合器：BenchmarkScientificVortexGenie2（转速100-3200rpm，定时1-60min）

14.温控水浴：JulaboSW23（温度范围-20-150°C，精度±0.1°C）

15.数据采集系统：SoftMaxPro7（软件兼容性，数据处理速度≥100样本/分钟）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"ELISA效价试验"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。