酵母菌即时PCR试验

检测项目

物种鉴定检测：

• 目标基因检测：18SrRNA基因序列比对（相似度≥98%，参照ISO21567）
• 特异探针设计：熔解温度Tm（60-65°C）、GC含量（40-60%）

定量分析检测：

• 拷贝数测定：检出限（≤100拷贝/mL）、定量线性范围（10^2-10^8copies）
• 相对定量：扩增效率（90-110%）、Ct值偏差（±0.5cycles）

突变筛查检测：

• 点突变检测：灵敏度（≤1%突变频率）、特异性（非靶标扩增率≤5%）
• 插入缺失分析：片段大小（100-500bp）、分辨率（±5bp）

耐药性测试检测：

• 抗真菌基因检测：最小抑制浓度MIC（参照CLSIM27）、耐药阈值（≥4μg/mL）
• 表达水平分析：foldchange（≥2倍差异）、p值（≤0.05）

纯度评估检测：

• 核酸纯度：A260/A280比值（1.8-2.0）、A260/A230比值（≥2.0）
• 抑制剂筛查：扩增抑制率（≤10%）、回收率（≥90%）

活力检测检测：

• 活细胞定量：活死细胞区分（PI染色阳性率≤5%）、活力指数（≥80%）
• 代谢活性：ATP浓度（≥1nM）、响应时间（≤30min）

污染物筛查检测：

• 交叉污染检测：背景信号（RFU≤100）、阴性对照合格率（100%）
• 环境污染物：重金属残留（Pb≤0.1ppm）、有机物干扰（CT值偏移≤1cycle）

样本处理效率检测：

• DNA提取效率：得率（≥50ng/μL）、完整性（DV200≥50%）
• 预处理时间：离心速度（10000rpm）、处理时长（≤15min）

数据分析检测：

• 扩增曲线分析：斜率（≥0.95）、R²值（≥0.99）
• 数据归一化：内参基因稳定性（M值≤0.5）、参考样品一致性（CV≤5%）

质量控制检测：

• 重复性测试：批内CV（≤5%）、批间CV（≤10%）
• 标准曲线验证：斜率（-3.3±0.1）、截距（≤40）

检测范围

1.烘焙食品：涵盖面包、蛋糕等，检测重点为酿酒酵母污染水平及活菌计数，确保微生物超标阈值≤10^4CFU/g。

2.啤酒发酵液：针对酿造过程样品，重点检测野生酵母污染（如Brettanomyces）及发酵效率，监测菌种比例偏差≤5%。

3.临床痰液样本：适用于呼吸道感染诊断，检测焦点为念珠菌属定量及耐药基因筛查，要求检出限≤50拷贝/mL。

4.环境水样：包括饮用水、废水，重点评估酵母菌总数及致病种（如Candida），符合安全标准≤100CFU/mL。

5.药品原料：针对制药中间体，检测酵母污染及无菌保证，重点关注活菌残留（≤1CFU/g）及突变风险。

6.化妆品样品：涵盖乳液、霜剂，重点筛查防腐剂耐受酵母（如Rhodotorula），污染阈值≤10^2CFU/g。

7.动物饲料：适用于畜禽饲料，检测焦点为发酵剂酵母活性及污染物（如霉菌共生），活菌率≥90%。

8.土壤样本：针对农业土壤，重点分析酵母群落多样性及生物修复潜力，检出限≤100拷贝/g。

9.空气样本：包括洁净室空气，检测酵母孢子浓度及种属分布，安全限值≤10CFU/m³。

10.血液样本：用于败血症诊断，重点定量侵袭性酵母（如Cryptococcus），要求时间效率≤3小时。

检测方法

国际标准：

• ISO21567:2004食品和饲料中酵母菌分子检测方法
• ISO22174:2005微生物核酸扩增通用要求
• CLSIMM03-A2临床样本实时PCR定量指南

国家标准：

• GB/T4789.15-2016食品微生物学检验酵母菌计数
• GB/T34777-2017病原微生物核酸扩增检测方法
• GB/T37869-2019环境水样微生物分子检测

（方法差异说明：ISO标准强调高温变性步骤（95°C×5min），而GB标准采用多步梯度升温；国际标准要求荧光探针淬灭验证，国家标准则简化内参基因使用；CLSI指南规定临床样本预处理时长（≤30min），GB标准放宽至45min以提高通量。）

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：型号PCR-Q100（检测通道：6个，温度精度±0.1°C）

2.高速离心机：型号CF-12000（最大转速：15000rpm，容量适配1.5-50mL）

3.核酸提取仪：型号NE-X50（通量：24样本/批次，得率≥90%）

4.分光光度计：型号SP-UV800（波长范围：200-800nm，精度±0.001Abs）

5.恒温混匀器：型号HM-300（温度范围：4-100°C，振荡频率300-1500rpm）

6.生物安全柜：型号BSL-2A（风速≥0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

7.微量移液器：型号MP-10（量程0.1-1000μL，精度CV≤1%）

8.电泳仪：型号GE-2000（电压范围：50-300V，凝胶尺寸10×10cm）

9.冷冻离心机：型号CF-C4（温度范围：-20-40°C，转速10000rpm）

10.恒温培养箱：型号IC-30（温度控制：30-37°C，稳定性±0.5°C）

11.振荡培养器：型号OS-200（转速：50-300rpm，容量100×样品）

12.灭菌器：型号AU-80（灭菌温度：121°C，压力15psi）

13.数据分析工作站：型号DA-PC（软件版本：v5.0，支持多重曲线拟合）

14.样本储存冰箱：型号RF-40（温度范围：-80-4°C，容量500L）

15.荧光显微镜：型号FM-100（放大倍数：40-1000X，激发波长488nm）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"酵母菌即时PCR试验"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。