检测项目
初级代谢物检测:
- 氨基酸定量:浓度范围(0.1-100μM),回收率(≥95%,参照ISO13903)
- 有机酸分析:草酸、柠檬酸含量(检出限≤0.01μM),pH稳定性(5.0-7.0)
- 碳水化合物检测:葡萄糖、果糖水平(相对标准偏差≤2%)
- 色素分析:类胡萝卜素浓度(吸光度450nm≥0.5)
- 抗生素代谢物:青霉素类似物含量(定量限0.05μg/mL)
- 毒素筛查:黄曲霉毒素B1(检出限≤0.1ppb)
- 脱氢酶活力:比活性(U/mg蛋白,参照ISO20665)
- 氧化还原酶:催化效率(kcat≥100s⁻¹)
- 水解酶:底物特异性(Km值0.1-10mM)
- 脂肪酸谱:饱和脂肪酸比例(C16:0占比≥30%)
- 磷脂分析:磷脂酰胆碱含量(相对丰度误差≤5%)
- 固醇检测:麦角固醇浓度(标准曲线R²≥0.99)
- ATP水平:能量状态指数(浓度0.5-5mM)
- 核苷酸碱基:腺嘌呤、鸟嘌呤含量(分离度≥1.5)
- 辅酶分析:NAD+/NADH比值(氧化还原平衡1.0-2.0)
- 活性氧物种:超氧阴离子水平(荧光强度≥1000AU)
- 抗氧化酶:超氧化物歧化酶活性(抑制率≥80%)
- 脂质过氧化:丙二醛含量(标准范围0.1-1.0μM)
- 水溶性维生素:B族维生素浓度(回收率≥90%)
- 脂溶性维生素:维生素E含量(定量限0.01μg/mL)
- 辅因子分析:生物素水平(线性范围0.05-50μM)
- 细胞信号分子:环腺苷酸浓度(灵敏度≤1pM)
- 生长调节剂:赤霉素类似物含量(相对偏差≤3%)
- 应激激素:脱落酸水平(校准曲线斜率0.9-1.1)
- 碳通量:¹³C标记葡萄糖代谢率(通量值≥0.5mmol/gDCW/h)
- 氮通量:¹⁵N标记氨基酸同化(同位素富集度≥98%)
- 氧消耗:呼吸速率(μmolO₂/min/mg蛋白)
- 胞内代谢物:总代谢物提取效率(≥95%)
- 细胞壁组分:β-葡聚糖含量(多糖纯度≥90%)
- 膜通透性:荧光染料渗透率(时间常数≤10s)
检测范围
1.酿酒酵母菌株:涵盖Saccharomycescerevisiae标准株,重点检测酒精发酵相关代谢物及酶活性动态
2.面包酵母培养物:工业烘焙用酵母,侧重碳水化合物代谢效率和氧化应激响应
3.裂殖酵母样本:Schizosaccharomycespombe模型,检测DNA合成相关核苷酸及细胞周期代谢物
4.致病酵母分离株:如Candidaalbicans临床株,聚焦毒力因子次级代谢物及耐药性标志物
5.重组酵母工程菌:基因修饰菌株,检测外源蛋白表达影响下的代谢通量偏移
6.工业发酵酵母:生物反应器培养样品,重点监控脂质积累和产物抑制效应
7.野生型酵母环境样本:自然环境分离株,检测适应性代谢物如渗透保护剂水平
8.突变体酵母库:基因敲除或过表达株,评估特定代谢通路缺失或增强的分子变化
9.酵母菌固定化产品:载体固定细胞,检测传质限制下的局部代谢物浓度梯度
10.酵母提取物制品:商业化裂解产物,侧重水溶性维生素和核苷酸的定量稳定性
检测方法
国际标准:
- ISO20665:2018微生物代谢物定量分析通则
- ISO13903:2005氨基酸测定标准方法
- ASTME2520-22脂质组学质谱联用技术规范
- GB/T35882-2018酵母菌代谢组学检测通用要求
- GB/T22400-2021高效液相色谱法测定核苷酸
- GB/T41404-2022气相色谱-质谱联用代谢物筛查方法
检测设备
1.液相色谱-质谱联用仪:Agilent6495C型(质量精度≤2ppm,流速范围0.1-2mL/min)
2.气相色谱-质谱联用仪:ThermoScientificISQ7000型(检测限≤0.1pg,柱温范围40-400°C)
3.核磁共振光谱仪:BrukerAvanceIII600MHz型(分辨率≥0.001ppm,场强14.1T)
4.高效液相色谱仪:WatersACQUITYUPLCH-Class型(压力上限15000psi,流通池光程10mm)
5.酶标仪:BioTekSynergyH1型(波长范围200-1000nm,精度±1%)
6.超速离心机:BeckmanCoulterOptimaXE-100型(最大转速100000rpm,温控±0.5°C)
7.恒温培养箱:MemmertINCO153型(温度范围5-80°C,均匀度±0.2°C)
8.荧光显微镜:OlympusIX83型(分辨率0.2μm,激发波长365-640nm)
9.生化分析仪:Hitachi7180型(检测通量≥400样/小时,试剂消耗≤50μL)
10.离子色谱仪:Metrohm930型(电导检测限≤0.1μS/cm,流速精度±0.5%)
11.紫外-可见分光光度计:ShimadzuUV-2600型(波长准确度±0.3nm,带宽0.1-5nm)
12.冷冻干燥机:LabconcoFreeZone6型(真空度≤0.001mbar,冷阱温度-84°C)
13.细胞破碎仪:SonicsVCX750型(功率输出50-750W,频率20kHz)
14.微孔板振荡器:EppendorfMixMate型(转速范围100-3000rpm,定时精度±1s)
15.电化学工作站:CHInstruments660E型(电位范围±10V,电流分辨率100fA)