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甲基化特异性PCR扩增验证

  • 原创官网
  • 2025-07-26 12:30:52
  • 关键字:北检研究院,甲基化特异性PCR扩增验证

相关:

概述:甲基化特异性PCR扩增验证是一种用于精确检测DNA甲基化状态的技术,核心检测对象为CpG岛甲基化水平。关键项目包括特异性引物扩增效率(如甲基化阳性率≥95%)、非甲基化抑制率(≤5%)、检测灵敏度(低至0.1%甲基化DNA)和重复性变异系数(CV≤10%)。该方法通过双引物系统区分甲基化和非甲基化序列,结合电泳或qPCR产物分析,确保扩增产物准确反映样本甲基化状态。验证过程涵盖阳性/阴性对照测试,以满足临床诊断或分子研究中的可靠性要求。

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注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

因篇幅原因,CMA/CNAS证书以及未列出的项目/样品,请咨询在线工程师。

☌ 询价

检测项目

特异性检测:

  • 甲基化阳性率:≥95%(参照ISO17025)
  • 非甲基化抑制率:≤5%
  • 交叉反应性:无非特异性扩增
灵敏度检测:
  • 检测下限:0.1%甲基化DNA
  • 定量范围:0.1%-100%甲基化水平
  • 稀释系列线性:R²≥0.98
重复性验证:
  • 批内变异系数:CV≤5%
  • 批间变异系数:CV≤10%
  • 扩增效率:90%-110%
准确性评估:
  • 甲基化水平偏差:±2%
  • 阳性符合率:≥98%
  • 阴性符合率:≥95%
检测限验证:
  • 最低DNA输入量:1ng
  • 扩增产物浓度:≥10ng/μL
  • 背景噪声控制:≤2%假阳性
样本兼容性:
  • 降解样本恢复率:≥85%
  • 抑制剂耐受:血红素≤1mg/mL
  • pH适应范围:7.0-8.5
试剂稳定性:
  • 引物保存期:-20°C下≥12个月
  • 酶活性保持:≥95%活性
  • 缓冲液有效期:室温下≥6个月
温度控制:
  • 退火温度精度:±0.5°C
  • 变性温度稳定性:94°C±1°C
  • 延伸时间误差:±5秒
数据分析参数:
  • 扩增曲线阈值:Ct值≤35
  • 熔解曲线峰宽:≤1°C
  • 数据归一化:内参基因ΔΔCt法
质量控制:
  • 阳性对照验证:100%检出率
  • 阴性对照验证:0%假阳性
  • 空白对照:无污染信号

检测范围

1.细胞培养DNA:涵盖HeLa、HEK293等细胞系,检测重点为培养过程甲基化漂移验证

2.组织切片DNA:包括福尔马林固定石蜡包埋样本,侧重DNA提取纯度与扩增抑制物清除

3.血液样本DNA:全血或血清来源,重点检测白细胞甲基化水平与溶血干扰排除

4.唾液样本DNA:口腔脱落细胞,关注细菌污染控制与低浓度DNA扩增

5.尿液样本DNA:泌尿系统细胞,检测重点为尿素抑制效应与甲基化位点稳定性

6.FFPE组织DNA:病理存档样本,侧重交联DNA修复与扩增效率优化

7.植物DNA:如拟南芥叶片,重点检测多糖杂质去除与甲基化模式验证

8.细菌DNA:研究用菌株,关注基因组甲基化同源性分析

9.法医样本DNA:微量或降解样本,检测重点为STR位点甲基化关联性

10.古DNA样本:考古来源,侧重脱氨基损伤校正与污染监控

检测方法

国际标准:

  • ISO20395-2019分子诊断检测验证要求
  • ISO17025-2017检测实验室能力要求
  • CLSIMM19-A核酸扩增方法验证指南
国家标准:
  • GB/T27417-2017合格评定分子检测方法验证
  • GB/T34796-2017核酸扩增检测方法通则
  • YY/T1596-2017甲基化检测试剂盒技术要求
方法差异说明:国际标准ISO20395强调引物特异性验证参数,而国家标准GB/T27417更注重样本前处理要求;CLSIMM19-A规定灵敏度测试使用稀释系列,GB/T34796则要求加入内参对照;温度控制方面,ISO标准允许±1°C偏差,国标YY/T1596要求±0.5°C精度。

检测设备

1.热循环PCR仪:AppliedBiosystems9700型(温度范围4°C-99°C,精度±0.1°C)

2.实时荧光定量PCR仪:Bio-RadCFX96型(检测通道6个,灵敏度0.1拷贝)

3.电泳设备:ThermoFisherE-Gel系统(电压范围50-150V,分辨率≤10bp)

4.分光光度计:NanoDropOneC型(波长260/280nm,检测限0.2ng/μL)

5.离心机:Eppendorf5424R型(转速14,000rpm,温控4°C-40°C)

6.恒温器:GrantInstrumentsJB系列(温度稳定性±0.2°C,范围20°C-100°C)

7.凝胶成像系统:SyngeneGBox(CCD分辨率5MP,曝光时间1-60秒)

8.DNA提取仪:QIAGENQiacube(通量12样本,提取效率≥90%)

9.微量移液器:GilsonPipetmanL型(体积范围0.1-1000μL,精度±1%)

10.恒温水浴:MemmertWNB14(温度精度±0.1°C,容量14L)

11.生物分析仪:Agilent2100型(片段分析范围25-12,000bp,CV≤5%)

12.测序仪:IlluminaMiSeq(读长2x300bp,通量25Mreads)

13.温控设备:VWRScientific1260型(梯度温控±0.3°C,程序存储10个)

14.数据记录仪:OmegaEngineeringRDXL系列(采样率1Hz,存储容量2GB)

15.振荡器:IKAKS260型(转速50-1500rpm,振幅3mm)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是与"甲基化特异性PCR扩增验证"相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

    材料检测服务

    专业分析各类金属、非金属材料的成分、结构与性能,提供全面检测报告和解决方案。包括金属材料力学性能测试、高分子材料老化试验、复合材料界面分析等。

    化工产品分析

    精准检测各类化工产品的成分、纯度及物理化学性质,确保产品质量符合国家标准。服务涵盖有机溶剂分析、催化剂表征、高分子材料分子量测定等。

    环境检测服务

    提供土壤、水质、气体等环境检测服务,助力环境保护与污染治理,共建绿色家园。包括VOCs检测、重金属污染分析、水质生物毒性测试等。

    科研检测认证

    凭借专业团队和先进设备,致力于为企业研发、质量控制及市场准入提供精准可靠的技术支撑,助力品质提升与合规发展。