心肌细胞代谢产物定量分析

检测项目

能量代谢产物检测：

• ATP浓度测定：检测范围0.1-10mM，ADP/ATP比率≤0.25（参照ISO15193）
• 乳酸水平分析：浓度阈值0.05-50mM（如：乳酸积累≥2.5mM指示缺氧）
• 磷酸肌酸定量：储存量5-20μM，能量缓冲指数≥1.2

• 丙酮酸浓度：检测下限0.01mM，丙酮酸/乳酸比≤0.1（参照GB/T5009.257）
• 葡萄糖-6-磷酸水平：浓度范围0.1-5mM，代谢通量偏差±5%
• 果糖-1,6-二磷酸定量：积累量0.05-1.0mM，响应时间≤30min

• 游离脂肪酸（FFA）测定：浓度阈值0.02-10μM，饱和度≥95%
• 甘油三酯（TG）水平：检测范围0.1-50μg/mL，氧化产物占比≤10%
• 胆固醇酯定量：积累量0.5-20μM，代谢转化率±0.1

• NADH/NAD+比率：比值阈值0.8-1.2，氧化还原状态±0.05
• cAMP浓度：检测下限1nM，激活响应≥20%
• ATP合成速率：通量0.5-5mmol/min/g，效率偏差±2%

• 谷氨酸浓度：范围10-500μM，转运活性≥50%
• 天门冬氨酸水平：检测限5μM，脱羧产物占比≤5%
• 支链氨基酸定量：积累量0.1-10mM，代谢失衡指数±0.1

• 活性氧（ROS）水平：浓度阈值0.1-50μM，荧光强度≥100AU（参照ISO11348）
• 丙二醛（MDA）定量：积聚量0.01-5μM，脂质过氧化指数≤1.0
• 超氧化物歧化酶活性：酶活单位20-100U/mg，响应时间≤60min

• 乳酸脱氢酶（LDH）活性：活性范围5-50U/L，泄漏率≥95%（参照GB/T21729）
• 肌酸激酶（CK）水平：检测下限0.5U/L，心肌特异性≥99%
• 丙酮酸脱氢酶活性：通量0.2-2mmol/min，抑制率偏差±3%

• 钙离子浓度：动态范围0.1-10μM，振荡频率≥1Hz
• 一氧化氮（NO）水平：检测限1nM，合成速率±0.05nmol/min
• 环磷酸腺苷（cAMP）响应：浓度阈值0.5-50nM，激活阈值≥10%

• 磷酸化蛋白定量：修饰位点数1-50pmol/mg，磷酸化率±1%
• 糖基化水平：修饰度0.1-5%，AGEs积累≤0.5μM
• 泛素化蛋白检测：积累量0.01-1μg/mL，降解效率≥90%

• 葡萄糖摄取率：速率0.1-5μmol/min/g，抑制响应≤10%
• 氧消耗测定：通量10-100nmolO2/min/mg，呼吸控制比≥3.0
• 脂肪酸氧化率：转化效率0.2-2.0，β-氧化指数±0.05

检测范围

1.体外培养原代心肌细胞：涵盖大鼠或人心肌细胞模型，重点检测缺氧诱导的乳酸积累及ATP耗竭响应

2.心肌细胞系样本：如HL-1或H9c2细胞系，侧重药物处理后糖酵解通量变化和氧化应激水平

3.小鼠心肌组织模型：缺血再灌注实验中获取样本，核心分析能量代谢产物失衡及酶活性衰减

4.人类心脏活检标本：手术中采集新鲜组织，定量ATP、CK等标志物，诊断心肌梗死病理状态

5.血清样本：源自心血管疾病患者，检测心肌特异性代谢物如肌钙蛋白-T及乳酸脱氢酶泄漏率

6.尿液样本：用于慢性心肌病监测，分析代谢废物肌酐浓度及氧化应激标志物排泄率

7.心肌细胞培养基：细胞培养上清液，重点评估分泌的乳酸、丙酮酸及细胞因子代谢产物

8.冷冻保存心肌标本：液氮处理组织，确保代谢产物稳定性，检测核苷酸降解及脂质过氧化水平

9.石蜡包埋固定组织：病理切片样本，结合免疫组化分析磷酸化蛋白修饰及代谢酶定位

10.心血管疾病动物模型：如糖尿病或高血压大鼠心肌，侧重糖脂代谢紊乱产物及通量异常评估

检测方法

国际标准：

• ISO15193:2009酶学方法测定代谢物浓度（要求校准曲线R²≥0.99）
• ISO22892:2006气相色谱-质谱联用定量脂质代谢产物（检测限低至0.1ng/mL）
• CLSIEP07-A2临床实验室酶活性检测规范（精密度偏差±2%）
• ISO13885-1:2020高效液相色谱法分析糖酵解中间体（流动相纯度≥99.9%）
• ISO11348-3:2007荧光法测定活性氧水平（激发波长488nm）

• GB/T5009.257-2016食品中乳酸检测方法（心肌应用需调整灵敏度至0.01mM）
• GB/T21729-2008酶联免疫吸附法测定肌酸激酶活性（与ISO方法差异在校准区间）
• GB/T32445-2015质谱法核苷酸定量标准（检测限比ISO高0.1nM）
• GB/T17213.15-2015电化学法钙离子检测（电位范围比国际窄±0.5V）
• GB/Z27924-2011代谢通量分析技术要求（通量计算偏差±1%）

检测设备

1.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII（流速范围0.01-10mL/min，精度±0.1%）

2.气相色谱-质谱联用仪：ThermoScientificISQ7000（质量范围10-1000m/z，分辨率0.1Da）

3.酶标仪：BioTekSynergyH1（波长范围200-1000nm，检测灵敏度0.001OD）

4.荧光显微镜：OlympusIX83（分辨率0.2μm，激发光源488nm）

5.流式细胞仪：BDFACSCantoII（分析速度10000cells/s，荧光通道8个）

6.生化分析仪：RocheCobasc501（测量精度±1%，通量300tests/h）

7.质谱仪：WatersXevoTQ-S（灵敏度fg/mL，质量精度±0.01Da）

8.电化学工作站：GamryReference600（电位范围±10V，扫描速率1mV/s）

9.pH计：MettlerToledoSevenExcellence（精度±0.001，温度补偿0-100°C）

10.低温离心机：Eppendorf5810R（转速100-15000rpm，温度控制-10°C至40°C）

11.超低温冰箱：ThermoScientific-80°CUltra-lowfreezer（温度稳定性±1°C，容积500L）

12.CO2培养箱：ThermoScientificHeracell150i（温度范围5-50°C，CO2控制0-20%）

13.紫外-可见分光光度计：ShimadzuUV-2600（波长190-1100nm，带宽1nm）

14.细胞代谢分析仪：SeahorseXFe96（氧耗率检测范围10-1000pmol/min，通量96孔）

15.生物反应器系统：SartoriusBIOSTATQplus（培养体积0.5-10L，pH控制±0.1）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"心肌细胞代谢产物定量分析"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。