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心肌细胞线粒体呼吸链功能分析

  • 原创官网
  • 2025-07-28 09:38:19
  • 关键字:北检研究院,心肌细胞线粒体呼吸链功能分析

相关:

概述:心肌细胞线粒体呼吸链功能分析专注于评估心脏细胞中线粒体电子传递链的效率和完整性,核心检测对象包括呼吸链复合物活性和氧化磷酸化过程。关键项目涉及复合物Ⅰ至Ⅳ的酶动力学参数、氧消耗速率(OCR)、膜电位(ΔΨm)变化及活性氧(ROS)产生量。通过量化NADH脱氢酶活力、琥珀酸脱氢酶活性及ATP合成速率,解析心肌细胞能量代谢状态,支持心血管疾病机制研究和药物毒性评估。

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注意:因业务调整,暂不接受个人委托测试,望谅解(高校、研究所等性质的个人除外).

因篇幅原因,CMA/CNAS证书以及未列出的项目/样品,请咨询在线工程师。

☌ 询价

检测项目

呼吸链复合物活性测定:

  • 复合物I活性:NADH脱氢酶活力(单位:nmol/min/mg蛋白,参照ISO17025)
  • 复合物II活性:琥珀酸脱氢酶活力(单位:μmol/min/mg蛋白)
  • 复合物III活性:泛醌-细胞色素c还原酶活力(单位:μmol/min/mg蛋白)
氧消耗分析:
  • 基础呼吸速率:氧消耗量(单位:pmolO2/min/百万细胞)
  • 最大呼吸容量:FCCP刺激下OCR峰值(范围≥200pmolO2/min)
  • 备用呼吸能力:计算值(差异≤10%)
ATP产生效率:
  • ATP合成速率:量化值(单位:nmolATP/min/mg蛋白)
  • 磷酸化效率比率:ATP/O比值(标准值≥2.5)
膜电位检测:
  • 线粒体膜电位:ΔΨm变化(荧光强度单位,参照GB/T16886)
  • 去极化速率:JC-1染料比率(红/绿荧光比≥1.5)
活性氧测定:
  • 超氧化物产生量:DHE荧光强度(单位:RFU/百万细胞)
  • 过氧化氢水平:AmplexRed检测(灵敏度≤1nM)
底物氧化特异性:
  • 谷氨酸/苹果酸氧化率:底物依赖性OCR(偏差≤5%)
  • 琥珀酸氧化率:抑制试验参数(IC50值计算)
细胞色素分析:
  • 细胞色素c还原:动力学参数(单位:s-1)
  • 细胞色素氧化酶活性:终点法测定(单位:nmol/min/mg)
钙离子动态:
  • 线粒体钙摄取:Fluo-4荧光变化(单位:ΔF/F0)
  • 钙释放速率:参数量化(范围0-100nM/s)
凋亡标志物:
  • 细胞色素c释放量:免疫印迹定量(单位:ng/mg蛋白)
  • caspase-3活性:荧光底物水解率(单位:RFU/min)
形态学评估:
  • 线粒体网络结构:融合/裂变指数(评分标准1-5级)
  • 嵴密度量化:电镜图像分析(单位:μm/μm²)

检测范围

1.人心肌组织样本:来源于心脏手术或活检标本,重点检测缺血再灌注损伤下的呼吸链复合物功能障碍及ATP合成衰减。

2.大鼠原代心肌细胞:分离自SD或Wistar大鼠心脏,侧重氧消耗速率动态变化和药物诱导毒性模型中的膜电位稳定性。

3.小鼠心肌细胞模型:涵盖转基因或基因敲除小鼠细胞,检测ROS产生水平及钙离子调控异常相关缺陷。

4.人心肌细胞系(如HL-1):永生化细胞系培养物,重点评估基础呼吸速率和复合物活性在长期传代中的衰退。

5.胚胎心肌细胞:来自发育阶段样本,检测线粒体生物发生相关参数及底物氧化特异性差异。

6.缺血再灌注模型心肌细胞:模拟临床缺氧环境,侧重膜电位去极化速率和凋亡标志物释放。

7.心力衰竭模型心肌细胞:诱导病理状态细胞,分析ATP产生效率降低和备用呼吸能力不足。

8.药物处理心肌细胞:暴露于心血管药物或毒素,检测复合物抑制参数及钙离子动态失衡。

9.基因编辑心肌细胞:CRISPR/Cas9修饰细胞,重点评估特定基因突变对呼吸链效率和ROS产生的影响。

10.新鲜分离心肌细胞:即时处理样本,检测氧消耗峰值和形态学完整性维持。

检测方法

国际标准:

  • ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价-第5部分:体外细胞毒性试验(侧重细胞生存率评估)
  • ASTME2525-08(2019)纳米颗粒在浸没细胞培养中细胞毒性评价标准试验方法(包含呼吸测量参数)
国家标准:
  • GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验(与ISO一致但增加温度控制细则)
  • GB/T37880-2019细胞线粒体呼吸功能检测方法(规定OCR测量精度和复合物活性计算)

检测设备

1.高分辨率呼吸测量系统:OroborosO2k(氧消耗率范围0-1000pmol/s,精度±1%)

2.荧光分光光度计:ThermoScientificFluoroskan(波长范围300-700nm,分辨率0.1nm)

3.共聚焦显微镜:LeicaTCSSP8(激发波长405-640nm,放大倍数10-100x)

4.流式细胞仪:BDAccuriC6(检测速率10000细胞/秒,荧光通道4个)

5.电化学分析仪:AgilentBioanalyzer(电流分辨率0.1pA,温度控制±0.2°C)

6.离心机:Eppendorf5424R(转速300-15000rpm,容量24x1.5mL)

7.实时PCR仪:Bio-RadCFX96(温度梯度0.1°C,通道数6个)

8.酶标仪:MolecularDevicesSpectraMax(吸光度范围0-4OD,吞吐量96孔板)

9.电镜系统:HitachiHT7800(分辨率0.2nm,加速电压80kV)

10.细胞培养箱:ThermoScientificHeracell(温度控制±0.1°C,CO2范围0-20%)

11.微量滴定板振荡器:IKAMS3(转速100-1500rpm,振幅3mm)

12.生化分析仪:BeckmanCoulterAU5800(检测限0.01μg/mL,样本量2μL)

13.荧光显微镜:OlympusIX83(物镜倍数4-100x,相机分辨率5MP)

14.超速离心机:BeckmanOptimaXE(最大转速100000rpm,转子容量6x50mL)

15.气体分析仪:SeahorseXFeAnalyzer(氧敏度10nM,pH范围6-8)

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期:7~15工作日,可加急。

资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试:支持定制化试验方案。

售后:报告终身可查,工程师1v1服务。

以上是与"心肌细胞线粒体呼吸链功能分析"相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。

    材料检测服务

    专业分析各类金属、非金属材料的成分、结构与性能,提供全面检测报告和解决方案。包括金属材料力学性能测试、高分子材料老化试验、复合材料界面分析等。

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    精准检测各类化工产品的成分、纯度及物理化学性质,确保产品质量符合国家标准。服务涵盖有机溶剂分析、催化剂表征、高分子材料分子量测定等。

    环境检测服务

    提供土壤、水质、气体等环境检测服务,助力环境保护与污染治理,共建绿色家园。包括VOCs检测、重金属污染分析、水质生物毒性测试等。

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    凭借专业团队和先进设备,致力于为企业研发、质量控制及市场准入提供精准可靠的技术支撑,助力品质提升与合规发展。