心脏灌流心肌细胞L型钙通道功能检测

检测项目

电生理特性检测：

• L型钙电流密度（ICa-L）：电流幅度（pA/pF）、半激活电压（V0.5，参照ISO10993-5）
• 通道激活时间常数：τ激活（ms）、τ失活（ms）

钙动力学检测：

• 钙瞬变幅度：ΔF/F0（相对荧光变化，≥150%）
• 钙衰减时间常数：τ衰减（s）、上升速率（s⁻¹）

力学性能检测：

• 细胞缩短幅度：最大缩短百分比（%，≥5%）
• 缩短速率：峰值速度（μm/s）、缩短时间（ms）

药理学响应检测：

• 钙通道阻滞剂IC50：抑制浓度（μM）、最大效应百分比（%）
• 激动剂响应：EC50（μM）、Hill系数（nH）

温度依赖性检测：

• Q10值：温度系数（范围1.5-3.0）
• 最佳工作温度：激活阈值（°C，±2°C）

pH依赖性检测：

• 半最大激活pH：pH值（6.5-7.5）
• 稳定性范围：功能保持率（%，≥90%）

氧化应激响应检测：

• 自由基诱导抑制：抑制率（%）、恢复百分比（%）
• 抗氧化剂保护：效应幅度（ΔpA/pF）

基因表达相关检测：

• CACNA1C基因表达：相对定量（倍数变化）
• 蛋白质丰度：Westernblot密度（OD值）

病理模型检测：

• 缺血再灌注损伤模型：通道功能损失（%，≤20%）
• 心力衰竭模型：电流密度变化（ΔpA/pF）、钙处理异常（Δτ衰减）

安全评估检测：

• 细胞存活率：操作后存活百分比（≥85%）
• 功能性完整性：动作电位正常发生率（%，≥95%）

检测范围

1.心室肌细胞：来自大鼠和小鼠模型，检测重点为收缩功能相关L型钙通道动力学。

2.心房肌细胞：涵盖兔和豚鼠来源，侧重节律控制中通道激活特性。

3.浦肯野纤维细胞：牛和猪心脏样本，评估传导系统钙电流密度变化。

4.胚胎心肌细胞：鸡和小鼠胚胎细胞，检测发育阶段通道功能成熟度。

5.诱导多能干细胞分化心肌细胞：人工培养模型，重点验证疾病模拟状态通道药理学响应。

6.冷冻保存心肌细胞：复苏后样本，侧重功能性完整性和存活率测试。

7.转基因心肌细胞：特定基因敲除/过表达模型，检测通道表达关联机制。

8.心脏组织切片：整体灌流样本，评估切片水平钙瞬变和力学协调。

9.心力衰竭患者来源细胞：病理组织样本，重点检测钙通道功能衰减幅度。

10.药物筛选模型细胞：高通量培养体系，侧重钙通道阻滞剂和激动剂响应测试。

检测方法

国际标准：

• ISO10993-5:2009医疗器械生物学评价细胞毒性测试
• ASTMF2504-05钙成像应用标准指南

国家标准：

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价细胞毒性试验
• GB/T34797-2017细胞电生理检测方法

国际标准ISO10993-5采用MTT法评估细胞毒性，而GB/T16886.5使用LDH释放测定，差异在于试剂选择和终点判定。ASTMF2504规范荧光钙成像参数设置，GB/T34797则强调电压钳制技术细节，包括采样率和噪声控制要求差异。

检测设备

1.膜片钳放大器：Axopatch200B型（带宽10kHz，噪声<0.1pA）

2.激光共聚焦显微镜：TCSSP8型（分辨率0.2μm，激发波长405-640nm）

3.心脏灌流系统：Langendorff灌流装置（灌流速率5-20ml/min，压力范围60-100mmHg）

4.荧光成像系统：ORCA-Flash4.0相机（帧率100fps，量子效率>80%）

5.细胞培养箱：Heracell150i型（温度37°C±0.5，CO2浓度5%±0.1%）

6.数据采集系统：Digidata1440A型（采样率100kHz，精度16bit）

7.微操纵器：MP-225型（精度1μm，行程范围25mm）

8.温度控制器：TC-324B型（温度范围20-40°C，稳定性±0.1°C）

9.pH计：SevenCompact型（精度±0.01pH，测量范围0-14）

10.离心机：5424R型（最大转速15000rpm，容量24x1.5ml）

11.电泳系统：Mini-PROTEANTetra型（电压范围50-300V，凝胶尺寸8x10cm）

12.PCR仪：Veriti96-Well型（升温速率5°C/s，温控精度±0.1°C）

13.流式细胞仪：FACSCantoII型（检测通道8个，流速12μl/min）

14.酶标仪：InfiniteM200型（吸光度范围0-4OD，波长范围200-1000nm）

15.超低温冰箱：DW-86L388型（温度-86°C，容量388L）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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