EB病毒DNA定量测试

检测项目

样本制备：

• 样本体积要求：采集量≥2mL（参照CLSIH3-A6）
• 保存条件：温度-70°C±2°C，时间≤6个月
• 抗凝剂使用：EDTA-K2浓度1.5-2.0mg/mL

DNA提取：

• 提取效率：回收率≥95%（参照ISO15189）
• 纯度检测：A260/A280比值1.8-2.0
• 污染物控制：蛋白质残留≤0.05μg/μL

定量分析：

• 病毒载量范围：10^1-10^8copies/mL
• 检测限：≤10copies/reaction
• 线性范围：R^2≥0.99

灵敏度测试：

• 检出概率：95%置信限≥95%
• 最低检测浓度：≤50copies/mL
• 稀释梯度：10倍系列稀释（参照CLSIEP17-A2）

精密度评估：

• 批内精密度：CV≤10%
• 批间精密度：CV≤15%
• 重复性测试：n=3次重复

特异性验证：

• 交叉反应：无其他疱疹病毒干扰（如CMV、HSV）
• 内源性抑制：抑制物检测限≤5%
• 引物特异性：熔解曲线单一峰

准确性确认：

• 偏差控制：±10%目标值
• 回收率测试：90-110%
• 标准品校准：国际标准物质NIBSC09/162

稳定性测试：

• 冻融稳定性：≤3次循环（载量变化±15%）
• 室温稳定性：≤4小时（参照YY/T1244）
• 长期存储：-20°C下≤1年

质量控制：

• 内标监控：内标CT值≤35
• 阴性对照：无扩增信号
• 阳性对照：CT值范围20-25

数据分析：

• 阈值设定：自动基线校正
• 扩增曲线分析：指数期斜率≥0.1
• 结果报告：copies/mL单位（参照ISO17511）

检测范围

1.外周血样本：EDTA抗凝全血，检测重点为病毒载量动态监测和疾病活动评估，需控制溶血干扰。

2.血清样本：无抗凝剂血清，用于抗体阴性患者筛查，重点检测低载量病毒（≤100copies/mL）。

3.血浆样本：肝素或EDTA抗凝血浆，适用于移植患者监测，侧重抗凝剂残留影响消除。

4.脑脊液样本：腰椎穿刺获取，用于神经系统感染诊断，检测重点为灵敏度提升（检测限≤5copies/mL）。

5.组织活检样本：福尔马林固定石蜡包埋组织，侧重DNA提取效率和降解控制（片段大小≥100bp）。

6.唾液样本：非侵入性采集，用于儿童筛查，重点检测口腔上皮细胞中病毒载量。

7.骨髓样本：骨髓穿刺液，用于淋巴瘤诊断，侧重高背景DNA去除。

8.尿液样本：晨尿收集，用于肾损伤相关监测，检测重点为pH值调节（pH6.5-7.5）。

9.呼吸道分泌物：鼻咽拭子或痰液，用于呼吸道感染，侧重粘液清除和抑制剂处理。

10.细胞培养物：体外培养细胞系，用于研究应用，检测重点为细胞计数标准化（10^5cells/mL）。

检测方法

国际标准：

• ISO15189:2022医学实验室质量和能力要求（涵盖全流程质量控制）
• CLSIEP05-A3精密度性能验证方法（规定CV计算和重复测试）
• CLSIEP17-A2检测限评估指南（定义LoD和置信区间）
• ISO17511:2020体外诊断测量溯源性（确保标准品校准链）

国家标准：

• YY/T1244-2014医用PCR分析仪（规定设备性能参数）
• GB/T29791.2-2013体外诊断试剂性能评估（要求准确性和精密度测试）
• WS/T420-2013临床实验室定量测定室内质量控制（定义质控规则）
• GB/T37868-2019核酸检测试剂盒通用要求（涵盖引物设计和验证）

（方法差异说明：国际标准如ISO15189强调实验室认证体系，而国家标准YY/T1244更侧重设备技术规范；CLSIEP系列提供详细统计方法，GB/T标准则简化操作流程，但核心参数如CV限值保持一致。）

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：ABI7500型（检测通道数6个，温度精度±0.1°C）

2.核酸提取仪：QIAGENQIAcube型（通量96样本/次，提取时间≤30分钟）

3.分光光度计：NanoDropOne型（检测范围2-3700ng/μL，波长260nm/280nm）

4.高速离心机：Eppendorf5424R型（转速范围300-15000rpm，容量24×1.5mL）

5.恒温混匀仪：ThermoMixerC型（温度范围4-99°C，振荡频率300-1500rpm）

6.超低温冰箱：ThermoScientificForma型（温度-86°C±1°C，容量700L）

7.生物安全柜：BakerSG403型（洁净度ClassII，风速0.5m/s）

8.微量移液器：EppendorfResearch型（量程0.1-1000μL，精度±1%）

9.电泳仪：Bio-RadPowerPac型（电压范围10-300V，电流400mA）

10.凝胶成像系统：SyngeneGBox型（分辨率5百万像素，曝光时间0.1-60秒）

11.恒温水浴锅：MemmertWNB型（温度范围室温-100°C，精度±0.1°C）

12.振荡器：IKAMS3型（频率50-1500rpm，振幅3mm）

13.纯水系统：MilliporeMilli-Q型（电阻率18.2MΩ·cm，总有机碳≤5ppb）

14.超净工作台：EscoAC2-4S1型（空气流速0.3-0.6m/s，过滤效率99.99%）

15.冷冻离心机：BeckmanCoulterAllegra型（温度-10°C至40°C，最大RCF25000×g）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"EB病毒DNA定量测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。