心脏灌流心肌细胞线粒体DNA损伤测试

检测项目

DNA损伤定量检测：

• 定量PCR分析：断裂指数（≥1.5，参照ISO10993-33）
• 彗星试验：尾距（≥20μm）、Olive尾矩（≥5.0）
• DNA氧化加合物检测：8-OHdG浓度（≥5ng/mgDNA）

• 膜电位测定：JC-1红绿比（≤0.8为去极化）
• ATP生成量：ATP浓度（≥2.5μmol/mg蛋白）
• 呼吸链复合物活性：复合物I活性（≥80%对照值）

• MTT试验：吸光度值（≥0.8OD570nm）
• AnnexinV-FITC/PI双染：凋亡率（≤15%）
• Caspase-3活性：荧光强度（≥200RFU）

• ROS水平：DCF荧光强度（≥1.5倍对照）
• SOD活性：抑制率（≥70%）
• GSH含量：还原型谷胱甘肽（≥5nmol/mg蛋白）

• 高通量测序：点突变频率（≥0.1%）
• PCR-RFLP：限制性片段长度（参照GB/T16886.3）
• 微卫星不稳定性：重复序列变异（≥2个位点）

• 灌流压力：压力值（60-80mmHg）
• 流速控制：流速（2-4mL/min）
• pH稳定性：pH值（7.35-7.45）

• WesternBlot：蛋白表达量（β-actin归一化）
• RT-qPCR：基因相对表达（2^-ΔΔCt法）
• 免疫荧光：共定位系数（≥0.7）

• 乳酸脱氢酶释放：LDH活性（≤200U/L）
• 肌钙蛋白T水平：cTnT浓度（≥0.1ng/mL）
• 细胞色素C释放：吸光度值（≥0.6OD450nm）

• 透射电镜：线粒体嵴结构（完整性评分≥4）
• 荧光显微镜：DNA损伤焦点（≥10个/细胞）
• 组织切片染色：H&E坏死区域（≤10%）

• 损伤相关性：皮尔逊系数（≥0.5）
• 生存曲线：Log-rank检验P值（≤0.05）
• 多变量回归：R²值（≥0.6）

检测范围

1.人类心肌活检样本：取自心脏手术患者，重点检测缺血再灌注损伤下的线粒体DNA断裂和氧化应激水平。

2.小鼠原代心肌细胞：源自C57BL/6品系，侧重灌流模型中DNA突变频率和细胞凋亡评估。

3.大鼠离体心脏灌流模型：Langendorff系统制备，重点监控灌流参数对DNA完整性影响。

4.心肌细胞系（如H9c2）：体外培养模型，检测重点为药物干预下ROS生成和ATP下降。

5.转基因动物心肌：如mtDNA突变小鼠，侧重突变累积与功能衰退相关性分析。

6.心力衰竭患者血清样本：结合心肌细胞共培养，检测cTnT释放和DNA损伤标志物。

7.缺血预处理模型：模拟短期缺氧，重点评估DNA修复机制和膜电位恢复。

8.药物毒性测试样本：如阿霉素处理心肌细胞，检测8-OHdG水平和凋亡率升高。

9.衰老心肌组织：取自老年动物，侧重线粒体DNA拷贝数减少和复合物活性下降。

10.心肌梗死区域样本：梗死边缘区，重点分析微卫星不稳定性和坏死扩散。

检测方法

国际标准：

• ISO10993-33:2020医疗器械生物学评价—基因毒性测试（DNA损伤检测）
• ISO17025:2017检测和校准实验室能力要求（质控流程）
• ISO19250:2010水质—DNA损伤测试（彗星试验方法）

• GB/T16886.3-2019医疗器械生物学评价—第3部分：基因毒性测试（点突变分析）
• GB/T27417-2017合格评定—分子生物学检测方法（PCR规范）
• GB/T39141.1-2020细胞检测—第1部分：活力与凋亡（MTT和AnnexinV法）

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：Bio-RadCFX96型（检测通道：6通道，温度精度±0.1°C）

2.彗星试验电泳系统：CleaverScientificCSL-COMET型（电压范围0-30V，电流100mA）

3.流式细胞仪：BDFACSCantoII型（激光波长488nm，检测速率10000细胞/秒）

4.荧光显微镜：OlympusBX53型（物镜倍数40×，分辨率0.2μm）

5.高效液相色谱仪：Agilent1260InfinityII型（检测限0.01ng/mL，流速1mL/min）

6.微孔板读数仪：ThermoMultiskanSkyHigh型（波长范围340-850nm，精度±0.005OD）

7.透射电子显微镜：JEOLJEM-1400Flash型（放大倍数100000×，分辨率0.2nm）

8.离体心脏灌流系统：ADInstrumentsLangendorff型（压力传感器范围0-200mmHg，精度±1%）

9.细胞培养箱：ThermoScientificHeracell150i型（温度控制37±0.5°C，CO₂浓度5%）

10.离心机：Eppendorf5430R型（转速范围100-15000rpm，温度控制4-40°C）

11.高通量测序仪：IlluminaNovaSeq6000型（读长2×150bp，通量20Gb/run）

12.酶标仪：BioTekSynergyH1型（检测模式：荧光、吸光、发光）

13.氧电极系统：Oxygraph-2k型（氧耗率测量范围0-500nmol/mL/min）

14.冷冻切片机：LeicaCM1950型（切片厚度5-50μm，温度-20°C）

15.生物安全柜：EscoAirstreamClassII型（风速0.3m/s，HEPA过滤效率99.99%）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

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