检测项目

1. 质粒DNA浓度测定：紫外分光光度法检测260nm吸光值（检测范围0.1-3000 ng/μL）

2. A260/A280纯度分析：比值标准1.8-2.0（超微量分光光度计测量）

3. 完整性电泳检测：0.8%琼脂糖凝胶电泳验证超螺旋结构（电压5V/cm, 时间45min）

4. 内毒素水平检测：鲎试剂法测定限值≤10 EU/mg DNA

5. 残留宿主DNA检测：qPCR定量分析阈值≤5 pg/μg plasmid DNA

检测范围

1. 大肠杆菌DH5α、TOP10等常规菌株培养物

2. pUC19、pET系列等重组质粒样本

3. 高拷贝/低拷贝质粒制备物

4. 线性化质粒酶切产物

5. 转染级超纯质粒溶液

检测方法

ISO 21571:2005《分子生物学分析用核酸提取通用技术要求》

GB/T 34796-2017《质粒DNA浓度测定紫外分光光度法》

ISO 21571 Annex B《琼脂糖凝胶电泳分析规范》

GB/T 33424-2016《生化制品中细菌内毒素测定方法》

ASTM E2144-01《实时荧光定量PCR法测定DNA残留标准方法》

检测设备

1. NanoDrop One超微量分光光度计（Thermo Scientific）：用于1-2μL样本的快速浓度及纯度分析

2. Bio-Rad PowerPac Basic电泳系统：支持50-150V宽电压范围的核酸电泳分离

3. Eppendorf 5430R高速冷冻离心机：最大转速30,000×g的梯度离心能力

4. Thermo Multiskan SkyHigh酶标仪：支持96孔板的内毒素吸光度检测

5. Lonetal PYROSTAR Neo内毒素检测仪：动态浊度法灵敏度达0.001 EU/mL

6. DeNovix DS-11 FX超微量核酸分析仪：双光束全波长扫描（190-840nm）

7. Thermo MaxQ 6000恒温振荡培养箱：37℃±0.5℃精密控温培养系统