泛醌甲基转移酶检测

检测项目

酶活性检测：

• 比活力测定：反应速率（V，单位：nmol/min·mg）、底物消耗率（参照ISO17025）
• 特异性验证：对泛醌类似物的选择性（Km偏差≤±5%）
• 催化效率：kcat值（范围：1-100s⁻¹）

动力学参数分析：

• 米氏常数：Km值（标准：0.1-50μM）
• 最大反应速率：Vmax值（精度±0.05μM/s）
• 抑制常数：Ki值（针对常见抑制剂）

分子特性表征：

• 分子量测定：SDS-PAGE分析（范围：30-60kDa）
• 等电点检测：pI值（pH4.5-8.0）
• 二级结构：CD光谱分析（α-螺旋占比≥40%）

纯度评估：

• 杂质含量：HPLC峰面积法（杂质≤1.0%）
• 单体比例：SEC分析（单体纯度≥95%）
• 内毒素检测：LAL法（水平＜0.05EU/mg）

稳定性测试：

• 温度稳定性：半衰期（t1/2，50°C下≥2小时）
• pH稳定性：活性保持率（pH7.0-8.0，≥90%）
• 储藏稳定性：冷冻-解冻循环（活性损失≤5%）

抑制剂敏感性：

• IC50值测定：针对甲基转移酶抑制剂（范围：0.01-100μM）
• 时间依赖性：Ki值变化（参照ASTME2524）

表达水平量化：

• WesternBlot：相对表达量（灰度值，±10%误差）
• qPCR分析：mRNA水平（Ct值≤30）

功能交互验证：

• 结合亲和力：SPR分析（KD值，1-100nM）
• 共沉淀实验：相互作用强度（洗脱回收率≥80%）

修饰状态检测：

• 甲基化程度：质谱定量（甲基化位点≥2）
• 磷酸化分析：抗体检测（阳性率≥95%）

质量控制指标：

• 批次一致性：RSD值（≤5%）
• 回收率测试：加标回收（90%-110%）
• 精密度验证：CV值（≤3%）

检测范围

1.重组蛋白样品：涵盖大肠杆菌或酵母表达系统纯化的CoQMT，重点检测酶活性和分子均一性

2.细胞裂解液：哺乳动物细胞系（如HEK293）提取物，侧重动力学参数和抑制剂响应

3.组织匀浆：肝脏、心脏等器官样本，检测泛醌代谢产物和酶稳定性

4.血清/血浆样品：临床来源生物流体，重点分析酶浓度和内源性抑制剂

5.纯化酶制剂：商业化酶产品，验证纯度和功能性指标

6.微生物培养物：细菌或真菌发酵液，检测表达水平和底物特异性

7.植物提取物：叶绿体富集样品，侧重pH稳定性和催化效率

8.药物制剂：酶抑制剂或激活剂配方，重点测试IC50值和副作用评估

9.临床样本：患者体液或组织活检，检测病理状态下的酶活性变化

10.体外反应体系：模拟代谢途径混合物，验证反应动力学和产物生成率

检测方法

国际标准：

• ISO15193:2009酶活性测定通用指南（采用分光光度法）
• ASTME2524-08抑制剂敏感性测试方法（基于动力学曲线拟合）
• ISO10993-5:2009生物相容性评估（用于细胞样品检测）

国家标准：

• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价（酶活性测定部分）
• GB/T27404-2008实验室质量控制规范（酶纯度分析）
• GB/T5009.170-2003食品中酶活性检测（适用于植物提取物）

方法差异说明：国际标准ISO15193强调缓冲液组成（如Tris-HCl），而GB/T27404采用PBS系统；ASTME2524要求高精度温控，GB/T标准允许±0.5°C偏差

检测设备

1.紫外-可见分光光度计：UV-1800型（波长范围190-1100nm，分辨率0.1nm）

2.高效液相色谱仪：HPLC-1260型（流速0.1-10mL/min，检测限0.01μg/mL）

3.质谱仪：Q-TOF5600+型（质量精度1ppm，扫描速度50Hz）

4.荧光检测器：FL-6500型（激发/发射波长200-900nm，灵敏度0.1nM）

5.超速离心机：CP-100NX型（最大转速100,000rpm，温度控制±0.1°C）

6.凝胶电泳系统：GE-2000型（电压范围50-300V，凝胶浓度8-15%）

7.蛋白质纯化系统：AKTApure25（流速0.01-25mL/min，pH精度±0.05）

8.实时PCR仪：qPCR-7500型（温度均一性±0.1°C，通量96孔）

9.酶标仪：EM-800型（波长范围340-750nm，OD精度±0.005）

10.生物传感器：SPR-Navi420（检测范围1-1000RU，响应时间0.1s）

11.恒温振荡器：TS-100型（温度范围4-80°C，振荡频率50-300rpm）

12.冷冻干燥机：FD-10型（真空度≤10Pa，冷凝温度-80°C）

13.细胞培养箱：CO2-170型（CO2控制5%，湿度95%）

14.电化学工作站：EC-600型（电位范围±10V，电流精度0.1%）

15.显微镜系统：DM-6000型（放大倍率40-1000×，分辨率

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"泛醌甲基转移酶检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。