检测项目

1.细菌培养：采用Middlebrook7H10/7H11固体培养基与BACTECMGIT960液体培养系统联合培养，温度32℃1℃，持续观察8周

2.PCR核酸检测：针对hsp65基因设计特异性引物（F:5'-ACCGCGACGACCTGAAGA-3'；R:5'-CTTGTCGAACCGCATACCCT-3'），扩增产物439bp

3.抗酸染色镜检：Ziehl-Neelsen染色法（含5%苯酚复红溶液），油镜观察100个视野（1000）

4.基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）：BrukerBiotyper系统进行菌种鉴定（置信度≥2.0）

5.药敏试验：微量肉汤稀释法测定阿米卡星（MIC范围0.25-64μg/mL）、克拉霉素（MIC范围0.12-32μg/mL）等药物敏感性

检测范围

1.皮肤组织活检样本（直径≥3mm）

2.皮下脓肿穿刺液（采集量≥1mL）

3.溃疡创面分泌物（无菌拭子采集3支）

4.淋巴结穿刺物（含抗凝剂EDTA-K2管保存）

5.术后清创组织标本（10%中性缓冲福尔马林固定）

检测方法

ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》规范样本采集与运输流程

CLSIM24-A3《分枝杆菌药敏试验执行标准》指导药敏试验操作

GB/T19438.1-2004《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》改良用于分枝杆菌核酸检测

WS288-2017《结核病诊断》行业标准扩展应用至非结核分枝杆菌鉴定

ASTME2146-01(2019)《临床实验室仪器性能验证标准》规范设备校准程序

检测设备

BACTECMGIT960全自动分枝杆菌培养系统：液体培养基快速培养与报阳监测（检出限≤10CFU/mL）

Bio-RadCFX96实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法多重核酸检测（通道数≥6）

BrukerMALDIBiotypersirius系统：基于参考谱库MBT-BDALv9.0的菌种鉴定平台

OlympusBX53荧光显微镜：配备汞灯光源及U-FBWA滤色块组（激发波长365nm）

SiemensAdvia2120i全自动血液分析仪：监测感染相关中性粒细胞比例变化（精度3%）

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光PCR系统：支持高分辨率熔解曲线分析（HRM）技术

LeicaCM1950冷冻切片机：病理样本快速制备（切片厚度3-5μm）

SysmexXN-9000体液分析模块：体液样本细胞计数与分类（检测速度≥60样本/小时）

IlluminaMiSeq基因测序仪：16SrRNA基因全长测序（读长2300bp）

BDPhoenixM50全自动微生物鉴定药敏系统：支持NTM药敏板条测试（测试卡容量50孔）