检测项目

1.DNA复制起始点定位：采用qPCR/NGS技术测定Ori区域坐标（50bp精度）

2.起始点活性验证：通过荧光素酶报告系统测量启动子活性（RLU≥10^4）

3.拷贝数变异分析：数字PCR定量检测单位基因组内复制起点数量（CV≤5%）

4.蛋白质结合位点鉴定：ChIP-seq测定起始识别复合体结合强度（IP效率≥70%）

5.甲基化状态评估：亚硫酸氢盐测序分析CpG岛甲基化水平（覆盖深度≥30）

检测范围

1.哺乳动物细胞系（HEK293、HeLa等）染色体DNA

2.原核生物质粒载体（pUC19、pET系列等）

3.临床分离病原微生物基因组（HPV16/18、EBV等）

4.PCR扩增产物（长度100bp-10kbp）

5.合成生物学构建体（BAC/YAC文库）

检测方法

ASTME3132-18核酸定量分析标准指南

ISO20395:2019生物技术-核酸靶序列定量要求

GB/T30988-2014DNA拷贝数变异检测技术规范

GB/T37872-2019高通量测序数据质量评价指南

ENISO21571:2005食品微生物学-核酸提取方法

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio6Pro：实时荧光定量PCR（分辨率0.01℃）

2.IlluminaNovaSeq6000：高通量双端测序（PE150模式）

3.Agilent4200TapeStation：核酸片段分析（灵敏度0.1ng/μL）

4.Bio-RadQX200DropletDigitalPCR：绝对定量系统（线性范围0.1%-100%）

5.NanoDropOneCUV-Vis分光光度计：核酸纯度测定（A260/A280比值）

6.CovarisM220Focused-ultrasonicator：DNA片段化仪（精度5bp）

7.EppendorfMastercyclerX50：梯度PCR仪（升温速率6℃/s）

8.MiltenyiBiotecMACSQuantTyto：细胞分选系统（分选纯度≥99%）