检测项目

1.酶活性测定：采用酪蛋白底物法（单位：U/mg），反应条件37℃/pH7.40.2

2.比活力计算：通过Lowry法测定总蛋白含量（μg/mL），结合活性数据计算比活力

3.热稳定性测试：50℃/60℃/70℃梯度温育30min后残余活性百分比测定

4.SDS-PAGE纯度分析：12%分离胶电泳检测单一条带（预期分子量34kDa5%）

5.内毒素限量：鲎试剂法测定≤10EU/mg（注射级标准）

检测范围

1.食品工业用重组蛋白酶制剂（烘焙/肉类嫩化剂）

2.生物医药级诊断酶原料（凝血分析/细胞消化酶）

3.基因工程菌发酵液及纯化中间体

4.工业洗涤剂用耐碱性蛋白酶添加剂

5.科研用CRISPR相关核酸酶修饰产物

检测方法

ISO20776:2019《体外抗菌活性测试-大肠杆菌蛋白酶抑制率测定》

GB/T23535-2009《蛋白酶制剂通用试验方法》第5.2节活力测定

ASTME1891-21《分子生物学级蛋白酶纯度评估标准指南》

EP10.0第2074章《欧洲药典重组蛋白酶质量控制规范》

GB4789.38-2021《食品安全国家标准食品加工用酶制剂检验》

检测设备

ThermoScientificGenesys150紫外分光光度计：波长280nm/660nm双通道吸光度测量

Agilent1260InfinityII高效液相色谱仪：C18柱分析酶分子量分布

EppendorfMastercyclerNexus梯度PCR仪：质粒残留DNA定量检测

MalvernZetasizerNanoZS90：动态光散射法测定酶聚合状态

Bio-RadChemiDocMP成像系统：SDS-PAGE凝胶电泳图谱分析

SartoriusCubisIIMSA225S-1CE-DA电子天平：万分之一精度称量系统

LonzaPyrosKinetixFlex内毒素检测仪：动态显色法鲎试剂测试

MemmertIPP110培养箱：温度波动0.3℃的稳定性测试环境