检测项目
1.病毒粒子形态观测:透射电镜观察直径28-32nm二十面体结构
2.RNA基因组分析:RT-PCR扩增目标片段(设计引物Tm值582℃)
3.衣壳蛋白检测:WesternBlot验证35kDa特异性条带
4.血清学反应:ELISA法测定OD450值≥0.8为阳性判定阈值
5.寄主接种试验:温室接种后观察典型花叶症状(潜伏期14-21天)
检测范围
1.卫矛属活体植株(包括大叶黄杨、扶芳藤等)
2.进出口苗木接穗与插条
3.组培苗生产原料与培养基残留物
4.园林工具表面附着物(剪刀、嫁接刀等)
5.土壤及栽培基质样本
检测方法
1.ISO16140-3:2021《分子生物学方法验证规程》
2.GB/T28068-2011《植物病毒核酸检测技术规范》
3.ASTME3066-16《植物病原体实时荧光PCR标准指南》
4.SN/T2123-2008《进出境植物检疫病毒检测通则》
5.OEPP/EPPOPM7/98(2)卫矛花叶病毒诊断规程
检测设备
1.HitachiHT7800透射电子显微镜(分辨率0.2nm)
2.AppliedBiosystemsQuantStudio5实时荧光定量PCR仪(支持TaqMan探针)
3.Bio-RadChemiDocMP成像系统(化学发光检测灵敏度fg级)
4.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪(波长范围340-850nm)
5.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机(最大转速30,000rpm)
6.MiltenyiBiotecgentleMACS组织研磨仪(程序化裂解植物组织)
7.Agilent4200TapeStation核酸分析系统(RNA质量指数RIN≥7.0)
8.LeicaCM1950冷冻切片机(切片厚度5-10μm精度控制)
9.ThermoScientificNanoDrop2000微量分光光度计(1μL样本检测)
10.MemmertIPP110培养箱(温度波动度0.3℃)