检测项目
1.酶活性测定:ATP/UTP/GTP/CTP转化效率(U/mg)
2.比活性分析:单位蛋白浓度下的催化能力(μmol/minmg)
3.纯度检测:SDS-PAGE电泳纯度(≥95%)与HPLC单峰比例(≥98%)
4.热稳定性测试:37℃/50℃/70℃下的半衰期(t1/2)测定
5.底物特异性验证:对8种核苷三磷酸的Km值测定(nM级精度)
检测范围
1.重组表达系统产物:大肠杆菌/酵母/哺乳动物细胞表达的重组核苷酸激酶
2.体外诊断试剂组分:PCR扩增试剂盒中的热稳定酶制剂
3.药物中间体:抗病毒药物合成用酶催化产物
4.科研级酶制品:同位素标记实验用高纯度酶制剂
5.工业级粗酶:生物催化生产过程中的质量控制样本
检测方法
1.ISO18114:2015《分子生物学用酶活性测定通用要求》
2.ASTME2313-20《重组蛋白酶解稳定性测试标准指南》
3.GB/T34800-2017《蛋白质纯度测定高效液相色谱法》
4.GB/T37871-2019《分子生物学试剂盒通用技术要求》
5.USP<42>《生物制品酶活性测定法》
检测设备
1.Agilent1260InfinityIIHPLC系统:配备ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6250mm),用于纯度分析
2.ThermoScientificMultiskanSkyHigh全波长酶标仪:支持340nmNADH吸光度动态监测
3.BeckmanCoulterProteomeLabXL-I分析型超速离心机:测定溶液构象稳定性
4.MalvernZetasizerNanoZSP:动态光散射技术测定粒径分布(0.3nm-10μm)
5.ShimadzuUV-2600i分光光度计:A280/A260蛋白浓度测定(0.002Abs分辨率)
6.WatersACQUITYUPLCH-Class系统:配备BEH300C4色谱柱(2.1100mm),用于微量样品分析
7.PerkinElmerLambda365UV/Vis光谱仪:热变性温度(Tm值)测定
8.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪:温度敏感性验证(0.1℃精度)
9.GEHealthcareKTApure25蛋白纯化系统:在线监测酶活性回收率
10.MettlerToledoTGA/DSC同步热分析仪:热重分析评估制剂稳定性