检测项目

1.基因突变分析：涵盖ALDH7A1（NM_001182.4）外显子区域测序及拷贝数变异检测。

2.α-氨基己二酸半醛脱氢酶活性测定：采用分光光度法（波长340nm），活性单位定义为nmol/min/mg蛋白。

3.尿α-氨基己二酸半醛定量：液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），检出限≤0.5μmol/L。

4.吡哆醇反应性评估：口服负荷试验后血浆PLP浓度监测（参考区间20-125nmol/L）。

5.线粒体功能评估：ATP生成速率测定（正常值≥450pmol/min/10^6细胞）。

检测范围

1.全血样本：EDTA抗凝全血用于基因组DNA提取及酶活性测定。

2.干血斑样本：新生儿筛查专用滤纸片（Whatman903）。

3.尿液样本：晨尿或随机尿（需添加0.1%甲酸防腐）。

4.皮肤成纤维细胞：原代培养细胞用于酶学确诊试验。

5.脑脊液样本：腰椎穿刺获取（需排除溶血污染）。

检测方法

1.基因测序：ISO/IEC17025认证的NGS平台（IlluminaNovaSeq6000），参照ACMG变异解读指南。

2.酶活性测定：改良的Bradford法（GB/T34800-2017），使用Sigma-Aldrich标准品校准。

3.代谢物定量：依据CLSIC62-A标准建立LC-MS/MS方法（ShimadzuLCMS-8060）。

4.细胞功能试验：参照ASTMF2906-12进行线粒体耗氧量测定。

5.质谱新生儿筛查：采用GB/T26377-2010推荐流程。

检测设备

1.IlluminaNovaSeq6000测序系统：全外显子组测序（平均深度≥100）。

2.ThermoFisherQuantStudio7Pro：实时荧光定量PCR（TaqMan探针法）。

3.WatersXevoTQ-SmicroLC-MS/MS：小分子代谢物定量分析（MRM模式）。

4.BeckmanAU5800生化分析仪：酶动力学法测定（温度控制0.1℃）。

5.Agilent2100Bioanalyzer：DNA/RNA质量评估（DV200≥30%）。

6.SeahorseXFe96Analyzer：细胞能量代谢实时监测。

7.EppendorfMastercyclerX50s：梯度PCR扩增（升降温速率6℃/s）。

8.OlympusIX83倒置显微镜：细胞培养状态监控（配备CO₂培养系统）。

9.MiltenyiBiotecGentleMACSOcto：自动化核酸提取（通量8样本/批次）。

10.Metrohm850ProfessionalIC离子色谱仪：阴离子代谢物分离检测。