检测项目
1.病毒外壳蛋白(CP)含量测定:采用ELISA法测定浓度范围0.1-100μg/g
2.RNA基因组浓度检测:RT-qPCR定量分析阈值≥103copies/μl
3.病毒粒子形态观察:透射电镜观测直径28-30nm二十面体结构
4.血清学特异性反应:WesternBlot检测54kDaCP条带显影
5.寄主接种试验:本氏烟局部枯斑计数≥20个/叶片
检测范围
1.豇豆属种子及幼苗(含水量≤12%)
2.田间采集叶片样本(保存温度-80℃)
3.土壤基质中病毒残留物(取样深度0-20cm)
4.昆虫介体(如叶甲科成虫)携带病毒量
5.农用器械/包装材料表面污染物
检测方法
ISO16140-3:2022《食品链微生物学-病毒检测方法验证》
GB/T28068-2011《植物病毒检测规程》
ASTME3066-16《植物病原体分子诊断标准指南》
SN/T2127-2015《进出境豆类种子病毒检疫规范》
OEPP/EPPOPM7/119(1)豇豆花叶病毒诊断协议
检测设备
1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪(扩增效率90-110%)
2.BioTekSynergyH1多功能酶标仪(波长范围200-999nm)
3.HitachiHT7800透射电子显微镜(分辨率0.2nm)
4.Eppendorf5430R高速冷冻离心机(最大转速30,000rpm)
5.Bio-RadMini-PROTEANTetra电泳系统(电压范围10-300V)
6.MiltenyiBiotecgentleMACS组织研磨器(处理量0.1-5g)
7.SartoriusCubisII精密天平(精度0.001mg)
8.MemmertINCOmed培养箱(控温精度0.1℃)
9.LabconcoPurifierLogic+生物安全柜(洁净度ISO5级)
10.Agilent4200TapeStation核酸分析系统(片段分辨率3bp)