检测项目

1.终止效率测定：通过RT-qPCR测量转录本丰度衰减率（≥95%为有效终止）

2.序列同源性分析：比对已知终止子数据库（如TransTermHP）的相似度（阈值≥85%）

3.RNA二级结构预测：使用mfold软件计算自由能（ΔG≤-30kcal/mol）

4.反向转录抑制测试：检测通读转录本比例（阈值≤5%）

5.温度敏感性验证：评估25-42℃范围内终止效率波动（允许偏差3%）

检测范围

1.质粒载体：包括原核表达载体（如pET系列）、真核表达载体（如pcDNA3.1）

2.病毒载体：腺相关病毒（AAV）、慢病毒（Lentivirus）构建体

3.重组蛋白生产系统：CHO细胞、HEK293细胞表达体系

4.mRNA疫苗：5'UTR与3'UTR之间的终止元件

5.合成生物学元件：标准化生物部件（BioBrick,GoldenGate模块）

检测方法

ISO21571:2013《分子生物学分析方法验证指南》

ASTME3027-15《合成DNA元件功能表征标准》

GB/T34791-2017《基因表达调控元件检测规程》

GB/T37873-2019《生物样本中核酸定量检测方法》

ISO20395:2018《生物技术-核酸测序质量要求》

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio6Pro：实时荧光定量PCR系统（检测灵敏度0.1fg/μL）

2.Agilent2100Bioanalyzer：RNA完整性数值（RIN≥8.0）测定仪

3.IlluminaMiSeq：高通量测序平台（读长2300bp）

4.NanoDropOneC：微量核酸浓度测定仪（检测范围2-27,500ng/μL）

5.Bio-RadCFXOpus96：梯度PCR仪（温控精度0.1℃）

6.BeckmanCoulterCytoFLEXS：流式细胞仪（检测限10^3particles/mL）

7.EppendorfMastercyclerX50s：热循环仪（升温速率6℃/s）

8.RocheLightCycler480II：多色荧光检测系统（6通道同步检测）