检测项目

1.直接镜检：采用10%KOH湿片法观察菌丝/孢子形态（放大倍数400-1000）

2.真菌培养：使用沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）及马铃薯葡萄糖琼脂（PDA），培养温度28℃2℃，周期4-6周

3.分子生物学检测：PCR扩增ITS区域（引物序列ITS1:5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'；ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'）

4.药敏试验：微量稀释法测定MIC值（测试浓度范围0.03-16μg/mL），涵盖特比萘芬、伊曲康唑等8种抗真菌药物

5.组织病理学检查：PAS染色法观察甲板内菌丝结构（切片厚度4-6μm）

检测范围

1.手足甲屑样本（采集量≥20mg）

2.病变甲板分层标本（近端/远端/侧缘病变区域）

3.甲下碎屑及角化物（含深层组织样本）

4.临床分离菌株（皮肤癣菌/酵母菌/霉菌纯培养物）

5.冷冻保存的核酸样本（DNA浓度≥10ng/μL）

检测方法

ISO21527-1:2008《真菌学检验规程-直接显微镜检查》

GB/T38502-2020《病原微生物实验室生物安全通用准则》

CLSIM38-A2《丝状真菌药敏试验参考方法》

ISO16256:2012《抗真菌药物敏感性试验参考方法》

GB/T35914-2018《皮肤癣菌鉴定规范》

WHO《真菌学诊断实验室手册》（2018版）

检测设备

OlympusBX53显微镜：配备微分干涉对比（DIC）功能，最大放大倍数1000

Bio-RadT100ThermalCycler：支持梯度PCR程序（温度精度0.1℃）

ThermoScientificHeracell150iCO₂培养箱：温控范围5-50℃（波动0.3℃）

SiemensADVIACentaurXP全自动化学发光仪：可定量检测β-D-葡聚糖浓度

SartoriusQuintix224-1CN分析天平：称量精度0.1mg（最大量程220g）

LeicaRM2235轮转式切片机：切片厚度调节范围1-60μm

ThermoNanoDropOne超微量分光光度计：核酸浓度测量范围2-27,000ng/μL

BDBACTECMGIT960全自动分枝杆菌/真菌培养系统：支持液体培养基快速培养