检测项目

1.病原菌形态学鉴定：菌丝直径（3-8μm）、孢子囊形态（球形/卵形）、游动孢子释放量（≥10^3CFU/g）

2.分子生物学检测：ITS序列比对（相似度≥99%）、PCR扩增条件（退火温度58℃/35循环）

3.孢子悬浮液浓度测定：血球计数板法（精度5%）、分光光度法（OD600=0.2-0.8）

4.致病力测定：离体叶片侵染率（≥80%）、病情指数分级（0-4级）

5.抗药性分析：EC50值测定（嘧菌酯/甲霜灵梯度0.1-100μg/mL）

检测范围

1.金鱼草植株样本：叶片/茎基部病斑组织（取样量≥5g）

2.栽培基质：泥炭土/珍珠岩混合物（含水量30-60%）

3.灌溉水样：pH6.0-7.5的循环水系统（过滤体积500mL）

4.种子带菌检测：表面灭菌处理（1%NaClO浸泡3min）

5.病原菌分离物保藏：CMA培养基斜面（保存温度4℃）

检测方法

1.ISO16140-3:2021微生物检测方法验证规范（分离培养法）

2.GB/T38581-2020植物病原卵菌检测技术规程（实时荧光PCR法）

3.ASTMD4442-20园艺基质中病原菌定量分析标准指南

4.GB/T3543.4-1995农作物种子检验规程（吸水纸培养法）

5.APHISPPQProtocol真菌分子鉴定操作手册（ITS区测序）

检测设备

1.奥林巴斯BX53显微镜：配备DP27摄像系统（1000油镜观察孢子结构）

2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：支持TaqMan探针法（通量96孔）

3.MemmertIPP110培养箱：温度控制精度0.3℃（18-30℃可调）

4.SartoriusQuintix224-1CN分析天平：称量范围0.1mg-220g（培养基配制）

5.Bio-RadChemiDocMP成像系统：化学发光检测（电泳条带分析）

6.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机：最大转速15,300rpm（DNA提取）

7.MilliporeMilli-QIQ7000超纯水系统：电阻率18.2MΩcm（试剂配制）

8.EscoAC2-4S1生物安全柜：HEPA过滤效率99.99%（病原分离操作）

9.BOXUNSPX-250B光照培养箱：光照强度0-30000Lux可调（致病性试验）

10.ShimadzuUV-2600i分光光度计：波长范围220-1400nm（核酸浓度测定）