检测项目
1.病原菌分子鉴定:采用ITS序列分析(PCR扩增区域ITS1-5.8S-ITS2),比对GenBank数据库
2.孢子形态学分析:测量冬孢子直径(18-22μm)、表面纹路(网状突起高度0.5-1.2μm)
3.侵染强度测定:统计病斑面积占比(0-4级分级标准),孢子堆密度(个/cm)
4.生理活性测试:孢子萌发率(25℃/RH>95%条件下24h萌发率≥85%)
5.寄主抗性评估:接种后21天病情指数(DI值)计算与抗性分级(R-S分级体系)
检测范围
1.赤竹植株活体样本:叶片病斑组织(直径≥3mm)、茎秆侵染部位(纵向剖切取样)
2.栽培基质:根际土壤(0-20cm深度)、腐殖质层(有机质含量≥15%)
3.繁殖材料:竹鞭段(长度5cm带芽体)、组培苗(接种后第3代继代培养物)
4.病原载体:农用器械表面拭子(无菌棉签采样面积10cm)、灌溉水样(滤膜孔径0.45μm)
5.防治药剂:三唑类杀菌剂残留量(戊唑醇检出限0.01mg/kg)
检测方法
1.ISO16198:2015植物病原菌分子检测规范(实时荧光定量PCR阈值循环数≤35)
2.GB/T28084-2011植物病害孢子悬浮液制备规程(离心转速3000rpm10min)
3.ASTMD7478-08植物病原菌抗药性测定法(EC50值计算采用概率单位法)
4.LY/T2567-2015竹类病害分级标准(病斑扩展速率≤0.5mm/d为抗性品种)
5.ISO21527-2:2008真菌孢子活性测定(FDA荧光染色法判定活孢比例)
检测设备
1.PCR仪:Bio-RadT100ThermalCycler(升降温速率4℃/s)
2.显微成像系统:OlympusBX53+DP27(1000油镜观察孢子纹路)
3.超速离心机:Eppendorf5430R(最大转速30,000rpm)
4.荧光分光光度计:HitachiF-7100(激发波长490nm/发射波长520nm)
5.环境培养箱:BinderKBW240(温控精度0.3℃)
6.超净工作台:ESCOAirstreamACB-4E0(洁净度ISO5级)
7.冷冻干燥机:ChristAlpha1-2LDplus(冷阱温度-85℃)
8.核酸浓度测定仪:ThermoScientificNanoDrop2000(检测范围2-3700ng/μL)
9.自动灭菌锅:YamatoSM510(灭菌温度121℃1℃)
10.激光粒度分析仪:MalvernMastersizer3000(孢子粒径分布测定)