检测项目
1.直接镜检:采用10%KOH湿片法或革兰染色法观察假菌丝及孢子体(显微镜放大倍数400-1000)
2.真菌培养:使用沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)进行分离培养(温度28℃1℃,湿度≥60%,培养周期3-7天)
3.MALDI-TOF质谱鉴定:通过BrukerMALDIBiotyper系统获取特征蛋白指纹图谱(质量范围2000-20000m/z)
4.抗真菌药物敏感性试验:测定氟康唑/伊曲康唑/伏立康唑MIC值(浓度梯度0.03-64μg/mL)
5.PCR核酸检测:靶向ITS1/ITS2区域引物(正向5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3';反向5'-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3')
检测范围
1.尿道口分泌物拭子样本(无菌棉签采集量≥0.1mL)
2.包皮冠状沟脱落细胞涂片(载玻片厚度1.0-1.2mm)
3.前列腺液离心沉淀物(离心参数3000rpm10min)
4.尿液沉渣样本(采集后处理时限≤2h)
5.组织活检标本(福尔马林固定浓度4%)
检测方法
1.ISO16256:2018《抗真菌药物敏感性试验参考方法》
2.CLSIM27-A3《酵母菌肉汤稀释法药敏试验标准》
3.GB/T38502-2020《病原微生物实验室生物安全通用准则》
4.WS/T497-2016《侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南》
5.ISO15189:2022《医学实验室质量和能力要求》
检测设备
1.OlympusCX43生物显微镜(配置LED光源及油浸物镜NA=1.25)
2.ThermoScientificHeracell150iCO₂培养箱(温度控制精度0.1℃)
3.BrukerMALDIBiotypersirius系统(激光频率60Hz,质量精度<50ppm)
4.BDPhoenixM50全自动微生物鉴定系统(可测试抗菌药物≥20种)
5.AppliedBiosystems7500实时荧光定量PCR仪(荧光通道数5个)
6.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机(最大转速15000rpm)
7.BioMerieuxVITEKMS质谱数据库(含超过300种真菌参考谱图)
8.SiemensADVIACentaurXP化学发光免疫分析仪(检测灵敏度0.1IU/mL)
9.LeicaCM1950冰冻切片机(切片厚度调节范围1-50μm)
10.ThermoScientificNunc细胞培养皿(直径90mm,通气孔设计)