检测项目

1.肠道菌群多样性分析：Shannon指数≥3.0为正常阈值；Chao1指数评估物种丰度；Simpson指数≤0.05提示失衡

2.致病菌定量检测：艰难梭菌毒素B基因（tcdB）拷贝数＞10^3CFU/g；大肠杆菌O157:H7抗原浓度≥50ng/mL

3.短链脂肪酸谱分析：乙酸≥50μmol/g；丙酸≥15μmol/g；丁酸≥10μmol/g为正常参考值

4.炎症标志物测定：钙卫蛋白＞50μg/g；乳铁蛋白＞7.25μg/mL；IL-8＞20pg/mL

5.肠道通透性评估：尿乳果糖/甘露醇排泄比（L/M）＞0.03提示屏障损伤

检测范围

1.粪便样本：需采集新鲜样本（2小时内）或-80℃冻存样本

2.肠黏膜活检组织：要求内镜取样后立即置于RNAlater保存液

3.血清样本：用于IL-6、TNF-α等系统性炎症因子检测

4.肠道冲洗液：需记录采集体积（通常50-100mL）及保存温度（4℃）

5.微生物培养物：包括需氧/厌氧分离培养的菌落悬液

检测方法

1.16SrRNA测序法：ISO17764-2007规定引物选择V3-V4区；IlluminaMiSeq平台PE300模式

2.qPCR定量检测：GB/T37870-2019规定TaqMan探针法；ABIQuantStudio6系统

3.GC-MS代谢组学：ASTMD7798-15规范短链脂肪酸衍生化流程；Agilent7890B色谱系统

4.ELISA炎症因子检测：GB/T40154-2021规定双抗体夹心法；BioTekSynergyH1酶标仪

5.Ussingchamber通透性试验：ISO10993-22:2017规范跨膜电阻测量标准

检测设备

1.IlluminaNovaSeq6000测序仪：16SrRNA全长测序（2250bp），通量≥20Gb/run

2.ThermoFisherQubit4.0荧光计：DNA定量范围0.1-60ng/μL（HS试剂盒）

3.Agilent2100Bioanalyzer：DNA完整性检测（DIN值≥7为合格）

4.EppendorfMastercyclerX50aPCR仪：支持384孔板梯度扩增程序

5.WatersXevoTQ-S质谱仪：SCFAs定量下限达0.1pmol/μL

6.OlympusBX53显微镜：100油镜观察菌体形态学特征

7.BDFACSCantoII流式细胞仪：CD14+单核细胞分选纯度＞95%

8.MillicellERS-2伏安计：跨上皮电阻测量精度0.5Ωcm

9.MemmertINCOmed培养箱：厌氧环境控制（O₂＜0.1%，CO₂5%）

10.SartoriusCubisMSA225S天平：称量精度0.01mg（符合ISO9001:2015）