可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 动物组织线粒体 | 肝脏、心肌、脑、骨骼肌等组织的能量代谢研究、缺血再灌注损伤评价、运动科学 | 线粒体复合物Ⅱ（SDH）活性、呼吸链酶谱、膜电位与ATP联动分析 | 差速离心制备线粒体，2,6-二氯酚靛酚分光光度法（600nm） |
| 培养细胞样品 | 候选药物线粒体毒性筛选、基因编辑株功能验证、细胞凋亡机制研究 | SDH活性、细胞活力、活性氧水平 | 裂解匀浆后酶标仪比色法或分光光度法 |
| 植物种子样品 | 牧草、林木、花卉与蔬菜种子生活力快速评价、种子老化与贮存研究 | 脱氢酶活性（四唑染色）、生活力分级、胚部着色率统计 | GB/T 2930.5-2017 生活力的生化（四唑）测定法 |
| 植物根叶组织 | 低温、盐渍、重金属等逆境胁迫下的呼吸代谢研究 | SDH活性、呼吸速率、可溶性糖与可溶性蛋白含量 | 冰浴匀浆提取后分光光度法 |
| 微生物细胞样品 | 酵母与细菌发酵活力监测、抑菌物质活性评价 | 脱氢酶总活性（四唑盐还原力）、菌体浓度 | TTC比色法（485nm） |
| 土壤与活性污泥 | 土壤微生物总体活性评估、污染物生态毒理研究 | 脱氢酶总活性、呼吸熵 | TTC比色法与称样培养联用 |
| 纯化酶制剂 | 酶学性质研究、抑制剂筛选、动力学参数测定 | 米氏常数、最大反应速率、抑制类型判定 | 分光光度法连续监测 |
检测项目
1. 线粒体复合物Ⅱ（SDH）活性：以2,6-二氯酚靛酚还原速率计，典型量级1-500nmol/min/mg蛋白，反应温度25-37℃
2. 脱氢酶总活性：四唑盐还原生成甲臜，485nm比色定量，以每克样品生成甲臜微克数计
3. 比活性归一化：线粒体蛋白定量采用Bradford法595nm或BCA法562nm，活性统一折算为每毫克蛋白
4. 特异性验证：丙二酸10-20mmol/L竞争性抑制对照，抑制率不低于80%判定结果可靠
5. 种子生活力分级：四唑染色胚部着色率不低于90%为高活力，50%-90%为中等活力，低于50%判定丧失生活力
检测范围
1. 动物组织：大鼠与小鼠肝脏、心肌、脑、骨骼肌、肾脏线粒体制备物
2. 细胞样品：原代培养细胞、肿瘤细胞系与基因编辑细胞株
3. 种子样品：禾谷类、豆类、牧草、林木与蔬菜种子
4. 微生物样品：酵母菌、乳酸菌、大肠杆菌等培养物悬液
5. 环境样品：农田土壤、林地土壤、污水处理活性污泥
检测方法
1. GB/T 2930.5-2017 草种子检验规程 第5部分：生活力的生化（四唑）测定法，四唑染色显示脱氢酶活性评价种子生活力
2. ISTA 国际种子检验规程（现行版）四唑测定章节，林木与花卉种子生活力的生化测定
3. 2,6-二氯酚靛酚分光光度法：琥珀酸钠20-50mmol/L为底物，600nm连续监测，摩尔消光系数19.1mmol⁻¹·L⁻¹·cm⁻¹
4. TTC比色法：四唑盐经脱氢酶还原生成红色甲臜，有机溶剂萃取后485nm比色定量
5. Bradford蛋白定量法：考马斯亮蓝G-250与蛋白结合后595nm比色，用于活性归一化计算
6. 差速离心制备法：600g离心去除细胞碎片，8000-12000g收集线粒体沉淀，全程0-4℃低温操作
检测设备
1. 紫外可见分光光度计（UV-2600型）：波长190-1100nm，光谱带宽1nm，支持动力学连续监测
2. 全波长酶标仪（Tecan Infinite系列）：200-1000nm，兼容96孔与384孔板，温控25-45℃
3. 高速冷冻离心机：最大相对离心力30000g，转速控制精度±50rpm，温控-10℃至40℃
4. 玻璃特氟隆匀浆器：磨砂间隙0.1-0.15mm，配套冰浴夹层
5. 超声波细胞破碎仪：输出功率20-500W可调，配脉冲模式
6. 恒温水浴锅：温度范围室温至100℃，控温精度±0.5℃
7. 分析天平：量程0-220g，可读性0.1mg
8. pH计：测量范围-2.000至16.000，分辨率0.001，配微型复合电极
9. 制冰机：日产冰量50-100kg，保障前处理全程低温
10. 恒温孵育摇床：温度4-60℃，转速50-300rpm，用于四唑染色孵育