可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
人外周静脉血（EDTA抗凝全血） 药物代谢研究中的DPD酶代谢能力评估、嘧啶代谢通路分析 DPYD基因分型、DPD酶活性测定 实时荧光PCR探针法、Sanger测序；单个核细胞匀浆HPLC酶活性法
外周血单个核细胞（PBMC） 淋巴细胞富集后酶活性定量、酶动力学参数研究 DPD酶活性（nmol/(h·mg蛋白)）、米氏常数Km与最大反应速率Vmax Ficoll密度梯度离心分离；5-氟尿嘧啶底物恒温孵育结合HPLC-UV定量
人血浆 / 血清 内源性嘧啶代谢物浓度与比值分析、酶活性间接评估 尿嘧啶（U）与二氢尿嘧啶（UH2）浓度、UH2/U比值 LC-MS/MS多反应监测定量、UHPLC-MS/MS联用技术
口腔黏膜脱落细胞 / 唾液样本 无创采样条件下的基因组DNA提取与基因多态性筛查 DPYD基因变异位点分型 基因组DNA提取结合荧光定量PCR、基因芯片
细胞裂解液 / 组织匀浆 体外细胞模型、肝组织与肿瘤组织样本中DPD表达水平研究 DPD蛋白含量、酶比活性、免疫印迹半定量分析 双抗体夹心ELISA法、SDS-PAGE电泳结合免疫印迹
ELISA试剂盒与质控品 试剂盒研发赋值、方法学验证与批间质量控制 线性范围、检出限、精密度、加标回收率 GB/T 33411-2025《酶联免疫分析试剂盒通则》、GB/T 44830-2024《酶联免疫试剂盒检测通则》

检测项目

1. DPD酶活性测定：DPD即二氢嘧啶脱氢酶（行业文献亦写作DPD酶），单个核细胞匀浆以5-氟尿嘧啶为底物经HPLC法定量，活性以nmol/(h·mg蛋白)计，批内精密度RSD≤10%

2. 尿嘧啶/二氢尿嘧啶比值：LC-MS/MS血浆定量，定量下限1-5ng/mL，健康人群UH2/U参考区间文献报道约4.0-8.0

3. DPYD基因分型：覆盖DPYD*2A（rs3918290）、D949V、HapB3单倍型等核心位点，突变等位基因检出限≤5%

4. DPD蛋白免疫定量：双抗体夹心ELISA法，检测限0.1-1.0ng/mL，标准曲线线性相关系数r≥0.99

5. 氟尿嘧啶代谢通路评估：约80%-85%的5-氟尿嘧啶经DPD酶催化分解代谢，酶活性水平与底物清除能力直接相关

检测范围

1. 人外周静脉血：EDTA或枸橼酸钠抗凝，用于基因分型与酶活性分析

2. 外周血单个核细胞：Ficoll密度梯度离心分离的淋巴细胞与单核细胞组分

3. 人血浆与血清样本：内源性嘧啶代谢物浓度与比值测定

4. 口腔拭子与唾液样本：无创基因组DNA来源

5. 细胞与组织样本：肝细胞系、肿瘤细胞系、组织匀浆与细胞裂解液

6. 生物样本库冻存样本：-80℃冻存全血、血浆及提取DNA

检测方法

1. GB/T 22576.1-2026 医学实验室 质量和能力的要求 第1部分：通用要求

2. GB/T 33411-2025 酶联免疫分析试剂盒通则

3. GB/T 44830-2024 酶联免疫试剂盒检测通则

4. GB/T 42060-2022 医学实验室 样品采集、运送、接收和处理的要求

5. 中国药典2020年版四部通则0512 高效液相色谱法（酶活性底物定量）

6. ISO 15189:2022 医学实验室 质量和能力的要求

检测设备

1. 高效液相色谱仪（Agilent 1260、岛津LC-20AT系列）：四元梯度泵，流速0.001-10mL/min，UV检测波长190-600nm

2. 三重四极杆液质联用仪（Waters Xevo TQ-S、AB SCIEX 5500系列）：质量范围m/z 5-2000，MRM模式定量

3. 全波长酶标仪（BioTek Synergy H1、Tecan Infinite M200 Pro）：波长200-999nm，吸光度范围0-4.0OD

4. 实时荧光定量PCR仪（ABI 7500、Bio-Rad CFX96）：96孔反应模块，温度4-99℃，4-6通道荧光检测

5. 冷冻高速离心机（Eppendorf 5810R、5430R系列）：最大转速15000rpm，温控-10-40℃

6. 恒温孵育器与恒温水浴锅：温度25-100℃，控温精度±0.5℃

7. 超低温冰箱：箱温-86℃，用于生物样本与试剂长期保存

8. 紫外分光光度计（Thermo NanoDrop 2000、岛津UV-1800）：波长190-1100nm，DNA定量灵敏度2ng/μL

9. 超微量分析天平（Mettler Toledo XP6）：可读性0.001mg

10. 全自动洗板机（Thermo Wellwash Versa）：8/12道清洗，残液体积≤1μL