重组蛋白检测

检测项目

纯度检测：

• 总蛋白纯度：≥98%（参照USP <1079>）
• 杂质含量：宿主细胞蛋白残留≤0.1%，DNA残留≤10pg/mg（参照EP 2.6.21）
• 溶剂残留：乙腈≤410ppm，甲醇≤3000ppm

活性检测：

• 生物活性：相对活性≥90%（参照EP 5.2.2）
• ED50值：细胞基测定范围0.1-100ng/mL
• 酶比活力：≥100U/mg（参照ISO 9001）

结构分析：

• 二级结构：α-螺旋比例40-60%（圆二色光谱）
• 聚集状态：单体比例≥95%（SEC-HPLC）
• 折叠完整性：熔解温度≥65°C（差示扫描量热法）

含量检测：

• 蛋白质浓度：1-10mg/mL（BCA法）
• 总蛋白量：回收率≥95%（Lowry法）
• 多肽含量：HPLC测定峰面积积分

杂质检测：

• 内毒素水平：≤0.1EU/mg（LAL法）
• 支原体检测：阴性（PCR法）
• 重金属残留：铅≤10ppm，砷≤3ppm

安全性检测：

• 无菌测试：阴性（膜过滤法）
• 致敏性评估：无反应（ELISA抑制法）
• 细胞毒性：IC50≥100μg/mL

稳定性检测：

• 加速稳定性：40°C, 75% RH, 3个月（活性保留≥80%）
• 长期稳定性：2-8°C, 24个月（纯度变化≤5%）
• 冻融循环：-20°C至室温, 5次（聚集增加≤2%）

分子量检测：

• SDS-PAGE分子量：与理论值偏差±1kDa
• 质谱分子量：精确质量±0.01%
• Western Blot验证：特异性条带检测

糖基化分析：

• N-糖基化位点：LC-MS鉴定
• 唾液酸含量：≥20μg/mg（HPAEC-PAD）
• 甘露糖比例：5-15%（质谱法）

功能性检测：

• 结合亲和力：KD≤10nM（SPR法）
• 催化效率：kcat/Km≥1000M⁻¹s⁻¹
• 免疫原性：抗体滴度测定

检测范围

1. 单克隆抗体： 涵盖IgG1/IgG4亚型，重点检测Fc功能活性、糖基化模式和聚集状态，确保治疗应用中的效价和安全性

2. 细胞因子： 如IL-2或IFN-α，侧重生物活性验证、稳定性评估和杂质控制，支撑免疫调节研究

3. 酶重组蛋白： 如蛋白酶或脂肪酶，检测比活力、热稳定性和底物特异性，适用于工业催化和诊断试剂

4. 疫苗抗原： 如HPV L1蛋白，重点纯度分析、免疫原性测试和内毒素水平，保障疫苗安全性和有效性

5. 融合蛋白： 如TNFR-Fc或scFv，检测结构完整性、功能域活性和聚集倾向，用于靶向治疗开发

6. 诊断试剂蛋白： 如HRP或AP标记抗体，侧重标记效率、特异性和灵敏度，确保体外诊断准确性

7. 生长因子： 如VEGF或EGF，检测浓度精确性、生物活性和细胞增殖效应，支持组织工程研究

8. 激素蛋白： 如重组胰岛素或生长激素，重点纯度、效力和稳定性，用于内分泌疾病治疗

9. 细胞培养上清液： 检测表达水平、杂质残留和初步活性，作为纯化前质量控制

10. 冻干制剂： 侧重复溶稳定性、水分含量≤3%和活性保留，确保长期储存适用性

检测方法

国际标准：

• USP <1079> 蛋白质含量测定方法
• EP 2.2.46 肽图分析标准
• ISO 10993-1 生物相容性测试
• ICH Q6B 生物技术产品质量规范

国家标准：

• ChP 2020 三部 重组DNA技术产品检查法
• GB/T 5009.5 食品中蛋白质测定
• GB/T 16886.1 医疗器械生物学评价
• GB/T 34796 重组蛋白制品通用要求

（差异说明：USP优先使用UV法测定纯度，而ChP要求附加质谱验证；ISO与GB/T在内毒素检测灵敏度上一致，但GB/T增加冻融循环测试；EP和ICH在活性测定方法相似，但ICH强调长期稳定性数据）

检测设备

1. 高效液相色谱仪： Agilent 1260 Infinity II（流速范围0.001-10mL/min，检测限0.1μg/mL）

2. SDS-PAGE电泳系统： Bio-Rad Mini-PROTEAN（凝胶尺寸8x10cm，分辨率1kDa）

3. ELISA微孔板阅读器： Tecan Infinite M200（波长范围230-1000nm，灵敏度0.01OD）

4. 质谱仪： Thermo Fisher Q Exactive（质量精度<3ppm，分辨率140,000）

5. 紫外-可见分光光度计： Shimadzu UV-2600（双光束，波长范围190-1100nm）

6. 圆二色光谱仪： Jasco J-1500（温度控制-10至110°C，波长范围185-850nm）

7. 生物活性检测系统： PerkinElmer EnVision（多模式检测，包括荧光和发光）

8. 毛细管电泳仪： Beckman Coulter PA 800 Plus（电压范围0-30kV，分离效率高）

9. 动态光散射仪： Malvern Panalytical Zetasizer Nano（粒径范围0.3nm-10μm，温度控制±0.1°C）

10. 等电聚焦系统： GE Healthcare IPGphor 3（pH梯度3-10，电流范围0-100mA）

11. PCR仪： Applied Biosystems 7500（实时荧光检测，温度精度±0.1°C）

12. 内毒素检测仪： Charles River Endosafe（灵敏度0.005EU/mL，检测时间15分钟）

13. 无菌测试装置： Sartorius Sartocheck（膜孔径0.22μm，真空压力范围0-500mbar）

14. 稳定性试验箱： Binder KB 115（温度范围-10至100°C，湿度控制±2%）

15. 冻干机： SP Scientific VirTis（冷凝温度-85°C，真空度≤0.1mbar）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"重组蛋白检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。