蛋白样本检测

检测项目

浓度检测：

• 总蛋白浓度：检测限0.1μg/mL、线性范围0.5-2000μg/mL（参照BCA法）
• 特异性蛋白浓度：回收率≥95%、偏差±5%

纯度检测：

• SDS-PAGE纯度：非还原条件纯度≥95%、还原条件杂质≤2%
• HPLC纯度：主峰面积≥98%、保留时间偏差±0.1min

分子量测定：

• SDS-PAGE分子量：误差±1kDa、迁移率校准
• 质谱分子量：精度±0.01%、质量范围1-500kDa

等电点检测：

• 等电点值：pI范围3-11、分辨率0.01单位
• 电荷分布：Zeta电位±30mV、缓冲液pH7.4

二级结构分析：

• α-螺旋含量：百分比偏差±2%、波长190-260nm
• β-折叠含量：FTIR光谱分析、信噪比≥50

功能活性检测：

• 酶活性：比活性U/mg、Km值测定
• 抗体结合活性：EC50值、亲和常数KD≤10nM

稳定性检测：

• 热稳定性：Tm值±1°C、变性温度范围
• 冻融稳定性：回收率≥90%、循环次数5次

糖基化分析：

• N-糖基化位点：糖型比例、质谱鉴定
• O-糖基化程度：糖基化指数0-100%、HPLC分离

修饰检测：

• 磷酸化水平：磷酸化位点数量、定量精度±5pmol/mg
• 乙酰化程度：修饰率偏差±3%、质谱检测

聚集状态分析：

• 单体含量：SEC-HPLC测定≥95%、多聚体≤3%
• 粒径分布：动态光散射Z-avg值±2nm

检测范围

1.重组蛋白：涵盖大肠杆菌、酵母表达系统，检测重点为表达效率、纯化后杂质控制及功能验证

2.单克隆抗体：包括IgG1、IgG4亚型，侧重CDR区域特异性、亲和力常数及片段化分析

3.酶制剂：涉及水解酶、氧化还原酶类，重点检测催化活性稳定性、抑制剂耐受性及温度敏感性

4.疫苗蛋白：如亚单位疫苗抗原，强调免疫原性验证、内毒素水平≤0.1EU/mg及无菌测试

5.诊断试剂蛋白：涵盖标记抗体、捕获蛋白，核心为检测限≤1pg/mL、交叉反应率≤5%及批间一致性

6.细胞因子：包括IL-2、TNF-α等，侧重生物活性剂量响应、受体结合效率及半衰期评估

7.生长因子：如EGF、VEGF，重点检测浓度梯度效应、细胞增殖率偏差±10%及储存稳定性

8.融合蛋白：涉及Fc融合、标签蛋白，核心为结构完整性、标签切除效率≥95%及功能域活性

9.天然蛋白提取物：来自动植物组织，强调提取纯度≥90%、降解产物检测及基质干扰消除

10.生物标志物蛋白：如肿瘤标志物，侧重定量线性范围、临床样本适用性及变异系数≤15%

检测方法

国际标准：

• ISO21572:2019食品和饲料中蛋白质的分子生物学检测方法
• ASTME252-06紫外光谱法测定蛋白质浓度标准试验方法
• IUPAC2.6.32蛋白质纯化色谱分析规范
• EP2.2.25欧洲药典蛋白电泳检测方法
• AOAC984.13食品蛋白质凯氏定氮法

国家标准：

• GB/T5009.5-2016食品中蛋白质的测定
• GB/T35809-2018生物制品中蛋白质分子量测定方法
• GB/T37864-2019生物样本蛋白质二级结构检测圆二色谱法
• GB/T38483-2020酶活性测定通用方法
• GB/T39511-2020抗体结合活性检测酶联免疫法

方法差异说明：BCA法与Lowry法在灵敏度上差异显著，BCA检测限0.1μg/mL优于Lowry的1μg/mL；SDS-PAGE与CE法在分辨率上，CE可达±0.1kDa而SDS-PAGE为±1kDa；HPLC与质谱在修饰检测中，质谱提供位点特异性而HPLC侧重定量通量

检测设备

1.紫外可见分光光度计：NanoDrop2000（波长范围190-840nm，精度±0.002AU）

2.离心机：Eppendorf5430R（最大转速15000rpm，容量4×100mL）

3.SDS-PAGE电泳系统：Bio-RadMini-PROTEANTetra（电压范围10-300V，凝胶尺寸8×10cm）

4.HPLC系统：Agilent1260InfinityII（检测限0.1μg/mL，流速范围0.001-10mL/min）

5.质谱仪：ThermoScientificQExactive（分辨率140000，质量精度±1ppm）

6.圆二色光谱仪：JascoJ-1500（波长范围190-260nm，温度控制±0.1°C）

7.酶标仪：MolecularDevicesSpectraMaxi3x（波长范围230-1000nm，孔板兼容96/384孔）

8.冻干机：ChristAlpha1-2LDplus（冷阱温度-85°C，真空度≤0.1mbar）

9.生物反应器：SartoriusBIOSTATB-DCUII（容量2L，pH控制±0.05）

10.流式细胞仪：BDFACSCantoII（检测通道8，流速≤60μL/min）

11.PCR仪：AppliedBiosystemsVeriti96（温度精度±0.1°C，升降温速率6°C/s）

12.显微镜：OlympusBX53（放大倍数1000×，分辨率0.2μm）

13.动态光散射仪：MalvernZetasizerNanoZS（粒径范围0.3nm-10μm，温度范围0-90°C）

14.电化学工作站：CHI660E（电流分辨率1pA，电位范围±10V）

15.恒温培养箱：MemmertIN110（温度范围0-70°C，均匀度

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"蛋白样本检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。