检测项目

1.病毒核酸检测：靶向VACV基因组的A56R/B5R片段，灵敏度≥50copies/μL

2.中和抗体效价测定：采用空斑减少中和试验（PRNT），效价≥1:32为阳性阈值

3.特异性IgG/IgM抗体检测：化学发光法测定OD值≥0.8判定阳性

4.病毒抗原免疫组化分析：使用单克隆抗体CB7.H12进行组织切片染色

5.细胞培养分离鉴定：VeroE6细胞系培养观察CPE效应

检测范围

1.临床样本：血清/血浆/疱疹液（采集量≥2mL）

2.组织病理标本：石蜡包埋组织/冷冻切片（厚度4-6μm）

3.疫苗产品：冻干活疫苗（滴度≥110^8PFU/mL）

4.生物制品原料：胎牛血清/细胞培养基（无菌率≥99.9%）

5.环境样本：实验室台面/生物安全柜擦拭样（采样面积25cm）

检测方法

1.ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》病毒分离条款

2.GB/T37870-2019《核酸检测试剂盒质量评价技术规范》

3.ASTME2888-19《细胞培养中病毒滴度测定标准指南》

4.WS/T797-2022《病原微生物实验室生物安全通用准则》

5.ISO/IEC17025:2017《检测和校准实验室能力通用要求》

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪（ABI7500）：TaqMan探针法核酸检测

2.全自动酶标仪（BioTekSynergyH1）：化学发光信号读取

3.III级生物安全柜（ESCOAC2-4S1）：样本前处理操作

4.超速离心机（BeckmanOptimaXPN-100）：病毒颗粒富集（100,000g）

5.冷冻切片机（LeicaCM1950）：组织样本制备（-20℃恒温）

6.流式细胞仪（BDFACSCantoII）：免疫细胞亚群分析

7.电子显微镜（HitachiHT7800）：病毒形态学观察（20万倍率）

8.CO2培养箱（ThermoForma3111）：细胞培养（37℃0.5℃）

9.核酸提取仪（QiagenQIAcube）：自动化RNA/DNA纯化

10.电泳系统（Bio-RadPowerPacBasic）：琼脂糖凝胶分析