可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
实验动物肝组织匀浆 SD大鼠、C57BL/6小鼠CCl4、酒精、D-GalN、缺血再灌注肝损伤模型的氧化应激水平评价与药效筛选 MDA含量、总脂质过氧化物（以MDA计）、4-HNE、8-iso-PGF2α、GSH/GSSG、SOD、CAT、T-AOC TBA比色法（532nm比色、600nm浊度校正）、HPLC-荧光法（Ex 515nm/Em 553nm）、LC-MS/MS同位素内标法定量
人肝组织标本 手术切除标本、穿刺组织经伦理审批后用于肝病机制的氧化损伤研究，不用于临床诊断 MDA、蛋白羰基、8-OHdG、4-HNE蛋白加合物 BCA法蛋白定量校正（562nm）、TBA法与色谱法互校，结果以nmol/mg蛋白报告
肝亚细胞组分 肝线粒体、微粒体体外温孵体系，评价NADPH依赖性脂质过氧化与化合物促氧化效应 MDA生成速率、共轭二烯（233nm）、过氧化值、氧耗速率 Fe2+-半胱氨酸或CCl4/NADPH诱导体系，硫代巴比妥酸衍生比色与HPLC联用确认
肝细胞与原代肝细胞 HepG2、Huh7、L02及原代大鼠肝细胞氧化应激造模与抗氧化活性物质筛选 胞内MDA、ROS水平、线粒体膜电位、细胞存活率联动分析 酶标仪532/600nm双波长测定，配合C11-BODIPY 581/591探针脂质过氧化流式分析
肝灌流与培养上清液 离体肝灌流模型、类器官培养体系中氧化应激动态监测 灌流液MDA、乳酸脱氢酶渗漏、谷丙转氨酶联动指标 HPLC-荧光法为主，避免灌流液成分对单纯比色法的干扰

检测项目

1. 肝组织MDA含量：TBA比色法测得正常大鼠肝约2-6 nmol/mg蛋白，CCl4及酒精损伤模型升高2-4倍

2. 总脂质过氧化物（以MDA计）：正常组织约50-400 nmol/g组织，随氧化损伤程度递增

3. 4-羟基壬烯醛（4-HNE）：约0.5-5 nmol/g，LC-MS/MS内标d4-4-HNE法定量

4. 8-异前列腺素F2α：约0.5-2.0 ng/g，脂质过氧化金标准标志物，体内代谢最稳定

5. 方法质控指标：加标回收率85%-115%，批内RSD小于5%，批间RSD小于10%，检出限约0.1微摩尔每升

检测范围

1. 实验动物肝组织：SD大鼠、Wistar大鼠、C57BL/6小鼠、BALB/c小鼠的新鲜及冻存肝组织

2. 人肝组织标本：经伦理审批的手术切除与穿刺组织，仅用于科研分析

3. 肝亚细胞组分：肝线粒体、微粒体、胞浆组分匀浆

4. 肝细胞系：HepG2、Huh7、L02及原代大鼠肝细胞裂解物

5. 肝损伤模型样品：CCl4、酒精、D-GalN、缺血再灌注及高脂饮食NAFLD模型肝组织

检测方法

1. TBA比色法：硫代巴比妥酸经典文献方法，酸性条件95℃水浴衍生15分钟，532nm比色、600nm浊度校正

2. GB 5009.227-2016 食品安全国家标准 食品中过氧化值的测定（配套评价脂质氧化程度）

3. ISO 3960:2017 动植物油脂 过氧化值的测定 碘量法（配套氧化初期指标比对）

4. GB/T 27404-2008 实验室质量控制规范 食品理化检测（加标回收、平行样与质控图管理）

5. JJF 1059.1-2012 测量不确定度评定与表示（MDA定量结果不确定度评估）

检测设备

1. 紫外可见分光光度计（UV-2600）：波长范围190-1100nm，光谱带宽1nm，用于532nm处TBA-MDA复合物定量

2. 全波长酶标仪（Varioskan LUX）：支持532/600nm双波长96孔板测定，通量高且重复性好

3. 高效液相色谱仪（1260 Infinity II配荧光检测器）：激发515nm、发射553nm，C18柱分离TBA-MDA特异性峰

4. 三重四极杆串联质谱仪（QTRAP 6500+）：MRM多反应监测模式，质量数范围m/z 5-2000

5. 高速冷冻离心机（5810R）：最大相对离心力20000g，温控-9至40℃，满足匀浆与组分分离

6. 组织研磨仪（TissueLyser II）：30Hz往复振荡，适配不锈钢研磨珠低温破碎组织

7. 荧光分光光度计（F-4600）：激发200-750nm、发射250-900nm，支持衍生产物扫描确证

8. 恒温水浴锅（DK-S26）：室温至100℃，控温精度±0.5℃，用于95℃TBA衍生反应

9. 超低温保存箱（DW-86L588J）：温度范围-60至-86℃，组织样品冻存防止离体后氧化

10. 超纯水系统（Milli-Q）：产水电阻率18.2兆欧每厘米，保障试剂配制本底洁净