可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 实验动物肝组织匀浆 | 四氯化碳、对乙酰氨基酚、酒精与高脂饮食肝损伤模型药效评价 | MDA含量、LPO总量、SOD与GSH联动分析 | TBA比色法532nm、BCA法蛋白标准化 |
| 肝线粒体与微粒体亚组分 | 亚细胞器膜脂过氧化机制研究、药物代谢酶相关氧化应激评价 | MDA、共轭二烯、脂氢过氧化物 | 差速离心制备、233nm紫外法、FOX法 |
| 原代肝细胞与肝细胞系 | 药物性肝损伤体外筛选、抗氧化化合物活性评价 | 细胞MDA、8-iso-PGF2α、C11-BODIPY荧光比值 | 96孔板酶标仪比色、LC-MS/MS、荧光成像 |
| 肝组织冰冻切片 | 脂质过氧化空间分布与原位半定量评价 | 氧化型与还原型探针荧光强度比值 | C11-BODIPY 581/591探针、激光共聚焦显微镜 |
| 肝组织脂质提取物 | 组织脂质体外氧化稳定性与氧化产物谱分析 | 过氧化值POV、共轭二烯值 | GB 5009.227-2016、ISO 3960:2017、氯仿甲醇抽提 |
| 肝灌流液与培养上清 | 离体肝灌流模型、肝类器官与器官芯片损伤监测 | 8-iso-PGF2α、4-HNE、游离MDA | ELISA法、HPLC-FLD、LC-MS/MS |
检测项目
1. 丙二醛（MDA）含量：TBA法532nm比色，正常大鼠肝组织约2-6 nmol/mg蛋白，损伤模型可升高2-4倍
2. 脂质过氧化物（LPO）总量：以MDA计正常约50-400 nmol/g组织，反映生物膜脂质过氧化整体水平
3. 4-羟基壬烯醛（4-HNE）：LC-MS/MS定量，正常肝组织约0.5-5 nmol/g，为脂质过氧化次级产物标志
4. 8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）：正常肝组织约0.5-2.0 ng/g，体内特异性与稳定性最优指标
5. 共轭二烯值：233nm紫外法测定，用于评价脂质过氧化早期启动阶段
6. 过氧化值（POV）：组织脂质提取物碘量法测定，反映氧化初期氢过氧化物积累水平
检测范围
1. 实验动物肝组织：SPF级SD大鼠、Wistar大鼠、昆明小鼠与C57BL/6小鼠新鲜肝组织
2. 亚细胞组分：肝细胞线粒体、微粒体与细胞膜组分制备物
3. 细胞样品：原代肝细胞、HepG2与AML12等肝细胞系裂解物
4. 体外氧化模型：四氯化碳、叔丁基过氧化氢与铁离子诱导的肝匀浆氧化体系
5. 低温保存样品：液氮速冻或干冰运输的肝组织及匀浆上清
检测方法
1. TBA比色法：肝匀浆与硫代巴比妥酸95℃水浴60分钟显色，532nm测定，四乙氧基丙烷标曲0-10 nmol/mL
2. TBA荧光法：激发515nm、发射553nm测定MDA-TBA加合物，灵敏度较比色法提高约10倍
3. GB 5009.227-2016 食品安全国家标准 食品中过氧化值的测定 滴定法与电位滴定法
4. ISO 3960:2017 动植物油脂 过氧化值的测定 碘量法
5. LC-MS/MS同位素稀释法：以d4-4-HNE、d4-8-iso-PGF2α为内标，MRM模式准确定量脂质过氧化产物
6. C11-BODIPY 581/591荧光探针法：探针氧化后荧光发射由约590nm蓝移至约510nm，用于原位脂质过氧化评价
检测设备
1. 组织匀浆器（FLUKO F6/10）：转速500-27000rpm可调，配10mL与30mL分散头
2. 高速冷冻离心机（Eppendorf 5810R）：最大相对离心力约20000×g，温控-9至40℃
3. 紫外可见分光光度计（Shimadzu UV-2600）：波长190-1100nm，光谱带宽1nm
4. 荧光分光光度计（Hitachi F-7000）：激发200-750nm，发射220-900nm，用于MDA-TBA加合物测定
5. 多功能酶标仪（Thermo Varioskan LUX）：波长200-1000nm，支持96孔与384孔板荧光及吸光度检测
6. 高效液相色谱仪（Agilent 1260 Infinity II）：配荧光检测器，分离测定MDA-TBA加合物
7. 三重四极杆液质联用仪（Thermo TSQ Quantis）：MRM模式定量，定量限达pg/mL级
8. 激光扫描共聚焦显微镜（Zeiss LSM 900）：405-633nm激光器，用于C11-BODIPY探针成像
9. 超低温冰箱：-86至-40℃保存组织样品，配备温度报警系统
10. 分析天平（Mettler Toledo XSR204）：0.1mg可读性，称量范围220g