可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法/参考
植物根部与根际土壤 蔬菜、果树、烟草、花卉等作物的根结病、孢囊病病害诊断与抗病品种评价 根结线虫雌虫会阴花纹鉴定、孢囊线虫阴门锥特征鉴定、二龄幼虫口针及尾形测量、群体密度定量（每100克干土虫口数） 形态学计量鉴定结合18S、28S D2-D3区与COI条形码测序，参考GB/T 24831-2009香蕉穿孔线虫检疫鉴定方法中的形态测量程序
木材、木片与木质包装材料 松木原木、锯材、木质托盘及电缆盘的进境检疫与疫木监管 松材线虫与拟松材线虫鉴别（雄虫交合刺、尾乳突及雌虫阴门盖特征）、致死温度耐受性验证、媒介天牛携带相关性排查 GB/T 23476-2009松材线虫病检疫技术规程、GB/T 35342-2017松材线虫分子检测鉴定技术规程，贝尔曼漏斗法分离
种苗、球茎与繁殖材料 香蕉、花卉种球、甘薯苗、马铃薯等的调运检疫与繁育基地监测 香蕉穿孔线虫、鳞球茎茎线虫、腐烂茎线虫种类鉴定，根部与鳞茎组织内线虫解剖提取，雌雄成虫及幼虫分期计数 GB/T 24831-2009、GB/T 33036-2016香蕉穿孔线虫监测规范、GB/T 33126-2016胼胝拟毛刺线虫检疫鉴定方法
粮食、饲料与水产原料 粮谷储运虫害排查、海水鱼及头足类寄生虫风险控制、输日输欧水产品监管 粮食粒瘿线虫鉴定、鱼类异尖线虫幼虫形态与分子鉴别（幼虫期无法靠形态定种时的COI序列比对） 胃蛋白酶消化法浓集虫体，显微镜检结合条形码测序，量尺测微目镜计量虫体长度与宽度
模式生物与培养保藏样品 秀丽隐杆线虫品系核对、线虫培养基与菌种交叉污染排查、实验室质控 品系身份核验（N2野生型及突变体核糖体序列比对）、培养物杂菌及螨类携带线虫污染鉴定 体视显微镜活体观察结合18S扩增测序、核糖体DNA内转录间隔区种间差异分析
土壤生态与根际群落样品 农田、草原、湿地土壤健康评价，有机培肥与连作障碍研究 线虫营养类群划分（食细菌、食真菌、植物寄生、杂食捕食）、群落成熟度指数计算、香农多样性指数计算 浅盘法与离心漂浮法提取，属级检索表鉴定，每100克干土个体计数统计

检测项目

1. 形态学种类鉴定：成虫体长200-12000微米级测量，口针长度10-45微米、食道腺与尾形特征计量比对定种

2. 会阴花纹特征鉴定：根结线虫雌虫会阴花纹弓纹高低、侧线数目与阴门裂形态区分南方、爪哇、花生、北方根结线虫

3. DNA条形码鉴定：18S、28S D2-D3区、内转录间隔区与COI基因扩增测序，序列与参考库相似度不低于98%界定种类

4. 特异分子检测：松材线虫种特异引物常规PCR与实时荧光定量检测，扩增曲线与溶解曲线双重判定

5. 酯酶同工酶表型：等电聚焦电泳酯酶谱型分析，区分形态近缘的根结线虫复合种

6. 群落结构分析：每100克干土线虫提取计数，营养类群占比统计，成熟度指数范围1.0-4.0分级评价土壤受扰状态

检测范围

1. 根结线虫属：南方根结线虫、爪哇根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫等常见四个种

2. 孢囊线虫属：大豆孢囊线虫、甜菜孢囊线虫、马铃薯金线虫等阴门锥特征鉴别

3. 滑刃目线虫：松材线虫、拟松材线虫、菊花滑刃线虫等检疫性与近似种鉴别

4. 迁移性内寄生线虫：香蕉穿孔线虫、腐烂茎线虫、胼胝拟毛刺线虫、最大拟长针线虫等

5. 水产与模式生物线虫：异尖线虫幼虫、秀丽隐杆线虫N2野生型及常见突变品系核验

检测方法

1. GB/T 23476-2009 松材线虫病检疫技术规程，规定木材取样、线虫分离与形态鉴定程序

2. GB/T 35342-2017 松材线虫分子检测鉴定技术规程，种特异引物扩增与结果判定

3. GB/T 24831-2009 香蕉穿孔线虫检疫鉴定方法，根部组织解剖与形态特征测量鉴定

4. GB/T 28977-2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法，花序与叶片取样鉴定程序

5. GB/T 33036-2016 香蕉穿孔线虫监测规范，田间布点与样品检测监测要求

6. GB/T 33126-2016 胼胝拟毛刺线虫检疫鉴定方法，根部与根际土鉴定技术依据

7. GB/T 32766-2016 最大拟长针线虫检疫鉴定方法，形态计量与分子验证结合鉴定

检测设备

1. 研究级正置生物显微镜：物镜4倍至100倍油镜，配微分干涉对比与数码成像测量系统

2. 体视显微镜：变焦比8.5比1，放大倍率8-60倍，用于活体挑取与表面结构初检

3. 贝尔曼漏斗分离装置：恒温25摄氏度水温浴，样品分离24小时收集活线虫

4. 全温振荡培养箱：温度范围5-60摄氏度，控温精度正负0.5摄氏度

5. 冷冻离心机：转速100-15000转每分钟，蔗糖梯度离心漂浮浓缩虫体

6. 梯度PCR仪：96孔样品模块，温度范围4-99摄氏度，退火温度梯度优化扩增

7. 实时荧光定量PCR仪：五通道荧光检测，温度均一性正负0.25摄氏度

8. 等电聚焦电泳系统：pH梯度3.5-9.5，用于酯酶同工酶谱型分离

9. 凝胶成像分析系统：制冷CCD相机，分辨率500万像素以上，电泳条带记录分析

10. 测微目镜与标定载物台测微尺：最小刻度10微米，虫体计量校准