可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| mRNA-LNP核酸脂质纳米颗粒 | 体外转录mRNA递送载体研发、可电离脂质配方筛选 | 内体逃逸效率、包封率、粒径与PDI、Zeta电位、细胞内摄取率 | CCF-4 FRET探针法、Split-GFP报告法；Malvern Zetasizer系列测粒径电位 |
| siRNA-LNP | 小干扰核酸递送体系、体外基因沉默研究 | 内体逃逸效率、细胞质游离核酸量、血清稳定性、细胞相容性 | 细胞分级分离联合RT-qPCR法、RiboGreen荧光定量法 |
| 荧光示踪LNP（DiD/DiR/Cy5标记） | 细胞摄取动力学与胞内转运路径研究 | 内体共定位率、荧光强度保持率、摄取动力学曲线、逃逸时程 | 激光共聚焦活细胞成像、流式细胞术定量 |
| 脂质体与可电离脂质空白配方 | 阳离子脂质配方优化、表观pKa筛选、膜扰动能力评估 | 表观pKa（TNS法）、Zeta电位、相变温度、内体膜扰动指数 | TNS滴定法、电泳光散射法、差示扫描量热法 |
| 自扩增核酸/环状RNA-LNP | 大片段核酸递送体系开发与工艺放大 | 内体逃逸效率、核酸完整率、包封率、降解程度评估 | 琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、RT-qPCR |
| 基因编辑组分LNP（RNP/质粒） | 体外细胞系编辑递送体系研究 | 递送效率、内体逃逸效率、胞内释放量、细胞相容性 | 报告基因法、流式细胞术、qPCR定量 |
检测项目
1. 内体逃逸效率：流式细胞术或成像法定量，逃逸比例典型区间1%~20%，报告法可分辨低至0.5%的差异
2. 粒径与多分散指数：动态光散射法测定，典型粒径60~100nm，PDI≤0.2
3. 包封率：RiboGreen荧光法，游离与包封核酸双定量，一般要求EE≥90%
4. Zeta电位：电泳光散射法，典型范围±5~±30mV，25℃测定
5. 细胞相容性：CCK-8/MTT法，接触24~48h细胞活力≥80%
6. 细胞质游离核酸量：分级分离联合RT-qPCR绝对定量，拷贝数级检出
检测范围
1. mRNA-LNP：可电离脂质（DLin-MC3、ALC-0315、SM-102类似结构）配方体系
2. siRNA-LNP：GalNAc偶联与非偶联递送体系
3. 荧光示踪LNP：DiR、DiO、Cy5、AF647标记体系
4. 脂质体：DSPC、DOPE、DOTAP等阳离子/中性脂质体
5. 裸核酸复合物：脂质-核酸静电自组装复合物、电转复合物
检测方法
1. CCF-4 FRET探针法：基于β-内酰胺酶底物的FRET信号转变，内体逃逸比率成像定量
2. 细胞分级分离联合RT-qPCR法：定量细胞质内游离递送核酸量，绝对定量逃逸水平
3. Split-GFP互补报告法：核酸载体进入细胞质后GFP片段互补发光，报告式定量
4. GB/T 29022-2012 粒度分析 动态光散射法(DLS)
5. ISO 19430:2016 粒度分析 纳米颗粒跟踪分析法(NTA)
6. ISO 13099-2:2012 胶体与界面化学 Zeta电位测定 第2部分：光学法
7. GB/T 16886.5-2017 医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验
检测设备
1. 激光共聚焦显微镜(Zeiss LSM 980)：405/488/561/640nm四通道，Airyscan分辨率120nm
2. 流式细胞仪(BD FACSCanto II)：三激光八色分析，可配高通量进样器
3. 动态光散射粒度仪(Malvern Zetasizer系列)：粒径0.3nm~10μm，Zeta电位±500mV
4. 纳米颗粒跟踪分析仪(Malvern NanoSight NS300)：粒径10~2000nm，浓度10⁶~10⁹ particles/mL
5. 多功能微孔板检测仪(BioTek Synergy H1)：荧光/化学发光/紫外吸收三模，波长230~999nm
6. 实时荧光定量PCR仪(Bio-Rad CFX96)：6通道荧光检测，控温精度±0.1℃
7. 透射电子显微镜(Hitachi HT7800)：点分辨率0.144nm，加速电压40~120kV
8. CO2培养箱(Thermo Heracell 150i)：温度精度±0.1℃，CO2浓度控制±0.1%
9. 超速离心机(Beckman Optima XPN)：最高转速100000rpm，温控0~40℃
10. 活细胞成像工作站(Leica THUNDER)：37℃/5%CO2培养舱，支持长时程时序成像