菌株原始种子温度耐受测试

检测项目

热稳定性测试：

• 存活率评估：温度上限55°C，存活率≥90%（参照ISO15214）
• 生长抑制测试：最大生长温度（T_max）测定，偏差±0.5°C
• 酶活性变化：淀粉酶活性衰减率≤10%（40°C至60°C梯度）

冷耐受测试：

• 冷冻存活率：-20°C保存48小时，存活率≥85%
• 解冻复苏测试：37°C恢复生长时间≤2小时
• 低温生长曲线：4°C条件下OD600值变化率

温度循环测试：

• 循环次数：10次（-20°C至37°C切换），Δ存活率≤5%
• 热冲击响应：80°C瞬时暴露30秒，存活率测定
• 细胞膜完整性：荧光染色法评估损伤百分比

温度梯度分析：

• 最适温度测定：生长速率峰值（μ_max），范围4°C至60°C
• 梯度存活曲线：D值计算（致死温度系数）
• 孢子耐受性：高温灭菌后存活计数≥10⁶CFU/mL

极端温度暴露：

• 高温极限测试：80°C持续1小时存活率
• 低温极限测试：-80°C长期存储复苏率≥80%
• 瞬时温度变化：从4°C至55°C切换耐受指数

生长温度范围：

• 最小生长温度（T_min）：测定下限值，偏差±0.3°C
• 最大生长温度（T_max）：测定上限值，参照ISO7218
• 温度系数Q₁₀：生长速率变化比（10°C间隔）

存活曲线建模：

• 时间-温度致死曲线：L_T值计算（90%致死时间）
• Z值分析：温度敏感性系数测定
• 恢复生长能力：37°C培养后菌落形成单位（CFU）计数

细胞活性测试：

• ATP生物发光法：活性细胞比率≥95%（温度影响）
• 膜通透性评估：PI染色法测定损伤比例
• 呼吸代谢率：耗氧量变化（μLO₂/min/mg）

保存稳定性：

• 冷藏耐受：4°C储存30天存活率≥90%
• 冻干恢复：冷冻干燥后水分含量≤5%，复苏率≥95%
• 长期冻存：-196°C液氮存储半年存活率测定

温度依赖性生理：

• 蛋白质变性测试：SDS-PAGE分析变性温度
• 核酸稳定性：DNA/RNA降解率（PCR扩增效率）
• 代谢产物积累：温度诱导产物浓度偏差±10%

检测范围

1.乳酸菌原始种子：保加利亚乳杆菌等菌株，重点检测冷藏稳定性及热加工耐受性，存活率变化为核心指标。

2.酵母原始种子：酿酒酵母或面包酵母菌株，侧重高温发酵环境耐受测试，生长曲线和代谢活性为关键。

3.双歧杆菌原始种子：益生菌应用菌株，检测胃酸模拟温度（37°C）耐受性，细胞膜完整性为重点。

4.枯草芽孢杆菌种子：工业酶生产菌株，测试高温灭菌（121°C）后存活率及孢子恢复能力。

5.大肠杆菌工程菌株：重组蛋白表达菌种，温度诱导稳定性检测，生长抑制和蛋白表达效率为核心。

6.霉菌原始种子：青霉菌或曲霉菌株，储藏温度（25°C以下）影响测试，孢子萌发率为重点。

7.放线菌种子：抗生素生产菌株，极端温度对孢子存活的影响，复苏率和代谢产物稳定性。

8.病毒载体原始种子：基因治疗用载体，温度敏感性（4°C至-80°C）测试，感染效价变化为重点。

9.藻类原始培养：微藻生物燃料菌株，温度生长范围优化，光合效率及生物量积累检测。

10.古菌极端耐受种子：高温环境古菌株，极限温度（80°C以上）耐受性，细胞活性及酶功能稳定性。

检测方法

国际标准：

• ISO15214:1998微生物热耐受测试方法（存活率测定）
• ISO7218:2007微生物学通用指南（生长曲线分析）
• ISO11133:2014培养基制备（温度梯度测试）
• ISO21528-2:2017肠杆菌科检测（冷耐受方法）

国家标准：

• GB/T4789.2-2016食品微生物学检测（存活率标准）
• GB/T16293-2010医药工业洁净室测试（温度控制规范）
• GB/T5750.12-2006生活饮用水检测（微生物温度耐受）
• GB/T16886.5-2017医疗器械生物学评价（细胞活性测试）

方法差异说明：ISO标准通常要求温度梯度精度±0.5°C及严格存活率计算，而GB标准侧重食品医药应用，允许±1°C偏差且简化复苏步骤；ISO7218涵盖更广温度范围，而GB/T4789.2针对特定菌株优化冷冻测试参数。

检测设备

1.恒温培养箱：MIR-554型（温度范围-10°C至80°C，精度±0.1°C）

2.冷冻干燥机：ChristAlpha2-4LDplus（最低温度-80°C，真空度0.01mbar）

3.恒温水浴锅：MemmertWNB14（温度范围5°C至100°C，均匀度±0.2°C）

4.微生物计数器：Bio-RadTC20（自动细胞计数，检测限10²CFU/mL）

5.PCR仪：ThermoFisherQuantStudio5（温度梯度功能，梯度范围0.5°C至2°C）

6.离心机：Eppendorf5425R（最大转速15000rpm，温控范围-10°C至40°C）

7.显微镜：OlympusBX53（温控载物台，温度范围-20°C至60°C）

8.分光光度计：ShimadzuUV-2600（OD600测量，波长精度±1nm）

9.温度记录仪：Testo175-T1（数据记录频率1Hz，温度范围-50°C至150°C）

10.液氮罐：Taylor-WhartonCX100（存储温度-196°C，容量100L）

11.恒温振荡器：InforsHTMinitron（温度范围4°C至80°C，振荡频率50-300rpm）

12.热封仪：样品封装设备（密封温度150°C至200°C）

13.冰点测定仪：低温测试设备（温度下限-50°C，精度±0.5°C）

14.温度冲击试验箱：ESPECTSE-11（温度变化速率≥10°C/min，范围-70°C至180°C）

15.存活率测试套件：基于ATP检测（发光值测量范围0-10000RLU）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"菌株原始种子温度耐受测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。