EN12021标准沉降菌测试

检测项目

沉降菌计数：

• 平板菌落数：每皿菌落形成单位（CFU/皿，参照EN12021附录A）、累积沉降量（CFU/m²·h，计算方式：菌落数×1000/(皿面积×采样时间)）
• 区域均一性：不同采样点菌落数变异系数（CV≤15%）、边缘与中心菌落数偏差（±20%）

微生物鉴定：

• 属种分类：16SrRNA基因测序（相似度≥97%）、生化反应鉴定（如VITEK2系统）
• 致病性微生物筛查：金黄色葡萄球菌（APIStaph试剂盒）、铜绿假单胞菌（GB4789.4-2016）、沙门氏菌（ISO6579-1）

环境参数关联：

• 温度影响：菌落数温度系数（Q10=1.5-2.0，10℃温差下菌落数变化倍数）
• 湿度相关性：相对湿度（RH）与菌落数拟合曲线（RH40%-60%区间菌落数稳定）
• 气流速度影响：气流速度（0.3-0.5m/s）对沉降效率的修正系数（±5%）

采样效率验证：

• 皿放置高度：1m±0.1m高度下采样效率（与标准高度偏差≤10%）
• 采样时间：30min-4h范围内菌落数线性度（R²≥0.95）
• 采样点布局：棋盘式布点与对角线布点的效率差异（≤8%）

培养基适用性：

• 营养琼脂培养基：pH值（7.0±0.2）、凝固强度（2%琼脂含量）
• 真菌培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）抑制细菌效果（添加氯霉素0.1g/L）
• 选择性培养基：麦康凯琼脂对革兰氏阴性菌的分离率（≥90%）

菌落形态分析：

• 形态特征：菌落大小（直径1-5mm）、颜色（白色/黄色/灰色）、边缘形状（光滑/锯齿状）
• 质地分析：黏液状/干燥状菌落比例（≥80%可识别）
• 色素产生：产色素菌落占比（≤5%为正常环境）

微生物存活能力：

• 耐干性：干燥环境（RH≤30%）下菌落存活时间（≥24h）
• 耐热性：45℃环境下1h菌落存活率（≤10%）
• 耐消毒剂性：75%乙醇作用30s后菌落杀灭率（≥99.9%）

污染溯源分析：

• 同源性分析：脉冲场凝胶电泳（PFGE）图谱相似度（≥85%为同一来源）
• 环境表面关联：表面擦拭样本与沉降菌的菌落类型匹配率（≥70%）
• 人员携带关联：操作人员手部采样与沉降菌的菌种一致性（≥60%）

动态环境监测：

• 生产时段监测：生产前/中/后菌落数变化率（生产中比生产前高1-2倍）
• 清洁消毒效果：消毒后1h菌落数降低率（≥90%）
• 设备运行影响：通风系统开启后30min菌落数下降率（≥50%）

极限条件测试：

• 无菌环境验证：A级洁净区（ISO5级）菌落数（≤1CFU/皿·4h）
• 高负荷环境：食品加工旺季菌落数峰值（≤100CFU/皿·h）
• 极端温度环境：-18℃冷链仓储环境菌落数（≤5CFU/皿·24h）

检测范围

1.食品加工洁净室：涵盖原料处理区、生产加工区、包装区，重点检测致病菌（如沙门氏菌、李斯特菌）筛查及交叉污染风险

2.制药生产车间：包括无菌药品（A级区）、非无菌药品生产环境，侧重无菌保证水平（SAL10⁻⁶）验证及微生物负载控制

3.医疗设备装配线：涉及手术器械、植入式医疗器械生产环境，重点检测致病性微生物（如金黄色葡萄球菌）及无菌包装区验证

4.生物实验室：包括PCR实验室、细胞培养室，侧重空气微生物（如芽孢杆菌属）对实验结果的干扰评估

5.化妆品灌装车间：涵盖护肤品、化妆品生产环境，重点检测霉菌（如曲霉属）及酵母菌（如假丝酵母菌）污染

6.电子元件洁净厂房：涉及半导体、集成电路生产环境，重点检测微生物代谢物（如有机酸）对元件的腐蚀风险

7.航空航天部件车间：包括卫星部件、飞机内饰生产环境，侧重低尘低菌环境（ISO6级）验证及微生物存活能力测试

8.冷链物流仓储环境：涵盖生鲜食品、疫苗仓储环境，重点检测低温微生物（如嗜冷菌）及温度波动对菌落数的影响

9.无菌医疗器械包装区：涉及注射器、输液器包装环境，重点检测无菌包装材料表面与空气微生物的关联性

10.动物实验设施：包括SPF级动物房、实验操作区，侧重空气微生物（如支原体）对动物健康的影响评估

检测方法

国际标准：

• EN12021:2017空气传播微生物的采样方法—沉降法（规定采样点布局、皿放置高度（1m±0.1m）、采样时间（30min-4h）、菌落计数方法（平板计数法））
• ISO14698-1:2003洁净室及相关控制环境—生物污染控制—第1部分：一般要求（补充微生物监测程序、采样频率、结果评价准则）
• ISO6579-1:2017食品链中微生物的检测—沙门氏菌属的检测—第1部分：方法学

国家标准：

• GB/T16293-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法（采样时间允许15min-4h，皿直径采用90mm或150mm，增加真菌培养（25-28℃，72±2小时）的可选要求）
• GB/T18204.3-2013公共场所卫生检验方法—第3部分：空气微生物（适用于公共场所环境沉降菌检测，规定了采样点数量（每50m²设1点，最少3点））
• GB4789.2-2016食品微生物学检验—菌落总数测定（用于食品加工环境沉降菌的菌落计数）

方法差异说明：EN12021要求采样点数量按房间面积计算（每10m²设1点，最少3点），而GB/T16293允许按房间功能调整（如关键操作区增加采样点）；EN12021规定培养温度为30-35℃，培养时间为48±2小时，GB/T16293与之一致，但增加了真菌培养（25-28℃，72±2小时）的可选要求；EN12021对采样皿的材质要求为聚苯乙烯或玻璃，GB/T16293允许使用聚碳酸酯材质，兼容性更广。

检测设备

1.沉降菌采样皿：直径90mm聚苯乙烯皿（带透气盖，耐121℃高压灭菌，皿底平整无裂痕）

2.微生物培养箱：型号：SANYOMIR-254，温度范围10-60℃（精度±0.5℃），湿度控制40%-80%RH（用于细菌培养）

3.真菌培养箱：型号：BinderKB240，温度范围20-30℃（精度±0.5℃），湿度范围60%-80%RH（用于真菌培养）

4.菌落计数器：型号：NikonEclipseE200，放大倍数10×-40×（计数精度±1CFU，带图像存储功能）

5.生物安全柜：型号：ThermoFisher1300SeriesA2，洁净度ISO5级（气流速度0.5m/s±0.05m/s，过滤效率≥99.99%）

6.PCR仪：型号：Bio-RadCFX96，荧光检测通道4个（检测限10copies/μL，支持多重PCR）

7.高压蒸汽灭菌器：型号：TOMYSX-500，灭菌温度121℃（压力103kPa，保持时间15min，容量500L）

8.超净工作台：型号：AIRTECHSW-CJ-1F，洁净度ISO5级（菌落数≤1CFU/皿·30min，气流速度0.45m/s±0.05m/s）

9.恒温恒湿箱：型号：HeraeusHCP108，温度范围-10-100℃（精度±0.5℃），湿度范围10%-95%RH（精度±3%RH，用于环境参数关联测试）

10.酶标仪：型号：TecanInfiniteM200，波长范围200-1000nm（吸光度精度±0.001A，用于生化反应鉴定）

11.离心机：型号：Eppendorf5810R，最大转速14000rpm（离心力20817×g，容量4×96孔板）

12.移液器：型号：EppendorfResearchPlus，量程0.5-10μL（精度±0.03μL）、10-100μL（精度±0.2μL）、100-1000μL（精度±0.5μL）

13.培养基制备仪：型号：ThermoFisherBarnstead/Thermolyne，加热功率1500W（可制备1-10L培养基，温度控制±1℃）

14.空气粒子计数器：型号：TSI9306-01，粒径范围0.3-10μm（计数效率≥95%，用于环境洁净度辅助验证）

15.生物显微镜：型号：OlympusBX53，放大倍数40×-1000×（带相差显微镜功能，用于菌落形态观察）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"EN12021标准沉降菌测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。