可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 细菌发酵液及上清液 | 发酵过程监测、产糖量追踪、培养基与工艺条件优化 | 胞外多糖产量、总糖含量、还原糖、残糖、pH、菌体浓度OD600、发酵液黏度 | 苯酚-硫酸比色法(490nm)、DNS比色法(540nm)、冻干称重法、旋转黏度计、分光光度计测OD600 |
| 冻干胞外多糖粗品 | 乙醇醇沉、膜分离等提取工艺验证、批次质量放行 | 多糖含量、水分、灰分、蛋白残留、核酸残留、溶解性 | GB/T 15672-2009苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝G-250法(595nm)、550℃灼烧重量法、核酸260nm紫外测定 |
| 纯化胞外多糖组分 | 结构解析、新糖源鉴定、科研数据支撑 | 重均分子量及分布、单糖组成摩尔比、糖醛酸含量、乙酰基取代度、官能团结构 | 凝胶渗透色谱联用多角激光光散射、PMP衍生-高效液相色谱(250nm)、傅里叶红外光谱(4000~400cm⁻¹)、一维与二维核磁共振 |
| 黄原胶(食品级、石油级) | 食品增稠稳定、油田钻井液与驱油剂、涂料与日化体系质量控制 | 黄原胶含量、1%水溶液表观黏度、丙酮酸含量、总氮、灰分、水分、粒度分布 | GB 1886.41-2025、旋转黏度计(25℃、低剪切区间)、气相色谱法测丙酮酸 |
| 透明质酸钠(发酵法) | 化妆品原料、食品原料、医用敷料原料评价 | 葡萄糖醛酸含量、透明质酸钠含量、分子量、蛋白质残留、水分、pH | QB/T 4576-2023、间羟基联苯法(520nm)、分子排阻色谱法、凯氏定氮法 |
| 生物被膜胞外聚合物EPS | 污水处理、海洋腐蚀、抗菌材料评价、环境微生物研究 | EPS总量、多糖与蛋白比值、糖醛酸含量、提取组分占比、表面电荷 | 阳离子交换树脂提取法、加热离心提取法、苯酚-硫酸法、Lowry改良法、Zeta电位仪 |
检测项目
1. 胞外多糖含量:苯酚-硫酸比色法490nm定量,葡萄糖当量计,发酵液产量典型0.5~40g/L,冻干粗品多糖含量50%~85%,纯化组分≥90%
2. 分子量及分布:分子排阻色谱法测定,重均分子量10⁴~10⁷Da,黄原胶典型2×10⁶~2×10⁷Da,分散系数1.2~3.0
3. 单糖组成:三氟乙酸水解后柱前衍生高效液相色谱250nm检测,黄原胶中葡萄糖、甘露糖、葡萄糖醛酸摩尔比约2:2:1
4. 糖醛酸含量:间羟基联苯法520nm测定,发酵法透明质酸钠葡萄糖醛酸含量≥42.0%
5. 蛋白质残留:考马斯亮蓝G-250比色法595nm,纯化多糖蛋白残留≤1.0%
6. 表观黏度:黄原胶1%水溶液25℃典型1200~1600mPa·s,随剪切速率升高呈显著剪切稀化
检测范围
1. 黄原胶:野油菜黄单胞菌发酵产物,涵盖食品级与工业级
2. 结冷胶:伊乐假单胞菌发酵产物,分高酰基与低酰基两种构型
3. 透明质酸钠:链球菌发酵法生产,化妆品级、食品级与医用级原料
4. 乳酸菌胞外多糖:嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种等产黏菌株的多糖组分
5. 细菌纤维素:木葡糖酸醋杆菌静态发酵膜状产物
6. 生物被膜胞外聚合物:铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等菌膜提取组分
检测方法
1. GB 1886.41-2025 食品安全国家标准 食品添加剂 黄原胶(2026年实施,代替2015版)
2. GB 25535-2010 食品安全国家标准 食品添加剂 结冷胶
3. QB/T 4576-2023 透明质酸钠(代替2013版)
4. GB/T 15672-2009 食用菌中总糖含量的测定(苯酚-硫酸比色法,总糖定量方法参照)
5. 《中国药典》2025年版四部通则0514 分子排阻色谱法(分子量与分子量分布测定)
6. 《中国药典》2025年版四部通则3421 多糖含量测定法(细菌荚膜多糖定量参照)
检测设备
1. 紫外可见分光光度计(UV-2600i型):波长范围190~1100nm,波长准确度±0.3nm,苯酚-硫酸法490nm比色定量
2. 高效液相色谱仪(LC-2030C 3D型):配二极管阵列检测器,柱前衍生单糖组成分析250nm检测
3. 凝胶渗透色谱系统:配多角激光光散射检测器与示差折光检测器,分子量范围10³~10⁷Da
4. 离子色谱仪(ICS-6000型):配金工作电极脉冲安培检测器,单糖组成纳摩尔级检出
5. 傅里叶变换红外光谱仪(Nicolet iS20型):波数4000~400cm⁻¹,分辨率4cm⁻¹,KBr压片测官能团
6. 核磁共振波谱仪(400~600MHz):¹H、¹³C及二维谱,多糖重复单元结构解析
7. 旋转流变仪(MCR 302型):剪切速率0.01~1000s⁻¹,扭矩0.5nN·m~230mN·m,流变特性与黏度测定
8. 恒温振荡培养箱:控温范围4~60℃(精度±0.3℃),转速40~300rpm,菌株发酵产糖培养
9. 高速冷冻离心机:4℃控温,最大相对离心力≥20000×g,发酵液除菌体与醇沉收集
10. 冷冻干燥机:冷阱温度≤-55℃,真空度≤10Pa,粗品制备与冻干称重定量