可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 淡水浮游硅藻水样 | 水源地水质生物监测、富营养化与水华预警、流域生态调查 | rbcL条形码种属鉴定、藻细胞密度计数、群落组成分析 | HJ 1215-2021滤膜-显微镜计数法；SN/T 4626-2016条形码鉴定流程 |
| 底栖附生硅藻（生物膜与天然/人工基质） | 河流健康评价、生态修复效果评估、排污影响带监测 | 底栖硅藻鉴定与计数、壳面形态复核、优势种rbcL测序 | EN 13946:2025采样与预处理；EN 14407:2014鉴定计数 |
| 海洋浮游硅藻样品 | 近岸生态调查、赤潮藻监测、海水增养殖区跟踪 | 浮游植物定性定量、优势种鉴定、rbcL条形码确证 | GB 17378.7-2007生物调查；光镜与电镜形态复核 |
| 纯培养硅藻藻株 | 藻种库保藏复核、科研材料溯源、模式株确证 | rbcL扩增测序鉴定、18S联合比对、形态学确证 | SN/T 4626-2016；SN/T 4714-2016数据库技术规范 |
| 环境DNA（eDNA）过滤水样 | 分子群落调查、历史样本回溯分析、早期预警 | rbcL短片段宏条形码扩增、多样性指数分析 | 叶绿体rbcL短片段文献方法；高通量聚类与参考库比对 |
| 显微镜检玻片与陈旧标本 | 图谱复核、分类订正、历史样品条码补测 | 酸洗封片复核、rbcL条码补测、图像存档 | EN 14407:2014；酸洗处理与封片制备 |
检测项目
1. rbcL基因片段扩增与双向测序：叶绿体rbcL条形码区，扩增长度约250~750 bp（全基因片段或宏条形码短片段），双向拼接有效序列≥500 bp，测序Q30≥80%；
2. 种属鉴定相似度判定：与参考序列库比对，属级一致阈值≥98.0%，种级≥99.0%，比对覆盖度≥95%，低于阈值按属级或未定阶元报告；
3. 藻细胞密度计数：滤膜法与计数框法联用，量程10²~10⁷ cells/L，壳面计数400~600个保障统计精度；
4. DNA提取质量：A260/A280比值1.7~2.1，模板浓度≥5 ng/μL，腐殖酸与盐类抑制物残留筛查；
5. 形态学联合鉴定：常见属壳面长径10~100 μm，壳纹密度约10~24条/10 μm，电镜分辨率纳米级复核壳缝与点纹结构；
6. 群落多样性分析：宏条形码数据ASV/OTU聚类，Shannon-Wiener指数、Simpson指数与优势度Y≥0.02判定优势种。
检测范围
1. 淡水浮游硅藻：星杆藻属、脆杆藻属、舟形藻属、桥弯藻属、直链藻属等常见属种；
2. 底栖附生硅藻：卵形藻属、异极藻属、菱形藻属等石面附着与生物膜类群；
3. 海洋与咸水硅藻：角毛藻属、海链藻属、根管藻属、骨条藻属等赤潮常见种；
4. 纯培养藻株：硅藻门中心纲与羽纹纲保藏株、模式株保藏号复核；
5. 饮用水源与景观水体样本：混合优势群落中硅藻组分的定量与鉴定；
6. 沉积物与历史标本：柱状沉积物硅藻组合分析、玻片标本条码补测。
检测方法
1. SN/T 4626-2016 DNA条形码物种鉴定操作规程：rbcL条形码扩增、测序与参考库比对鉴定的主流程；
2. SN/T 4714-2016 DNA条形码数据库技术规范：参考序列收录、比对与命名管理要求；
3. HJ 1215-2021 水质 浮游植物的测定 滤膜-显微镜计数法：浮游硅藻定量计数主线方法；
4. HJ 1216-2021 水质 浮游植物的测定 0.1 mL计数框-显微镜计数法：计数框法定量配套；
5. GB 17378.7-2007 海洋监测规范 第7部分：近海污染生态调查和生物监测：海洋浮游植物调查、固定与镜检要求；
6. GB/T 12990-1991 水质 微型生物群落监测 PFU法：微型生物群落群集过程与群落结构监测；
7. EN 14407:2014 水质 河流底栖硅藻的鉴定与计数指南：底栖硅藻光镜鉴定计数的国际参考；
8. EN 13946:2025 水质 河流底栖硅藻常规采样与预处理指南：底栖硅藻采样、酸洗与封片的国际参考（2025新版）。
检测设备
1. 研究级生物显微镜（无限远校正三目系统）：1000×油镜观察壳面点纹，配0.01 mm镜台测微尺与2000万像素制冷相机；
2. 场发射扫描电镜（冷场发射源）：分辨率1.0 nm@15 kV，放大倍数30~800000倍，壳缝与纹饰亚纳米级复核；
3. 梯度PCR仪（96孔型）：控温4~100℃，升降温速率≥3℃/s，温场均匀性≤±0.5℃，支持退火温度梯度优化；
4. 毛细管电泳测序仪（24/48通道阵列）：单道读长≥800 bp，五色荧光检测，碱基读取Q30占比≥80%；
5. 凝胶成像分析系统：UV与蓝光双激发，500万像素制冷CCD，条带灰度定量与分子量标记比对；
6. 高速冷冻离心机：最大相对离心力30000×g，控温-10~40℃，配1.5/2 mL角转子；
7. 垂直流超净工作台：操作区洁净度ISO 5级，断面风速0.25~0.45 m/s可调；
8. 超低温冰箱（-86℃型）：控温-40~-86℃，双独立制冷回路，停电保冷保护≥8 h；
9. 超纯水系统：出水电阻率18.2 MΩ·cm@25℃，TOC≤50 μg/L，0.22 μm终端除菌过滤；
10. 浮游植物计数框组（0.1 mL/1 mL）：0.1 mL框分100格、每格0.001 mL，配22 mm×22 mm盖玻片与虹吸取样装置。