临床用药免疫原性研究

检测项目

抗药抗体（ADA）检测：

• 总抗体检测：酶联免疫吸附试验（ELISA）定量，抗体滴度（终点稀释法，≥1:100为阳性）
• IgG亚类分型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4（流式细胞术，亚类占比偏差±5%）
• 抗体亲和力：表面等离子体共振（SPR）检测，解离常数（KD）≤1×10⁻⁸M

中和抗体（Nab）检测：

• 病毒中和试验：基于细胞病变效应（CPE），50%抑制浓度（IC50），参照FDA指南
• 细胞报告基因assay：荧光素酶报告系统，有效浓度（EC50），线性范围10-1000ng/mL
• 中和活性验证：竞争性结合试验，抑制率≥80%判定为阳性

免疫复合物分析：

• 循环免疫复合物（CIC）：聚乙二醇（PEG）沉淀法，浓度≥10μg/mL为异常
• 复合物分子量分布：凝胶过滤色谱（GFC），主峰分子量偏差±10%
• 复合物成分鉴定：免疫印迹法（Westernblot），检测药物-抗体结合形式

细胞因子谱分析：

• 促炎细胞因子：TNF-α、IL-6、IL-1β（流式细胞术，检测限<1pg/mL）
• 抗炎细胞因子：IL-10、IL-4（ELISA，线性范围5-500pg/mL）
• 趋化因子：CXCL10、CCL2（多重液相芯片，CV≤10%）

T细胞免疫反应评估：

• T细胞增殖：CFSE染色，增殖指数（PI）≥2判定为阳性
• 细胞因子分泌：酶联免疫斑点试验（ELISPOT），斑点形成细胞（SFC）≥10/10⁶细胞
• T细胞表位亲和力：MHC四聚体染色，阳性细胞比例≥0.1%

B细胞表位鉴定：

• 线性表位：肽扫描（PEPSCAN），结合率≥2倍阴性对照为阳性
• 构象表位：圆二色光谱（CD）分析，二级结构变化率≤10%
• 表位阻断试验：竞争ELISA，抑制率≥50%判定为有效表位

补体激活检测：

• 补体片段：C3a、C5a（化学发光法，检测限<0.1ng/mL）
• 膜攻击复合物（C5b-9）：ELISA定量，浓度≥50ng/mL为激活
• 补体溶血活性（CH50）：经典途径溶血率，偏差±10%

免疫原性风险预测：

• 蛋白序列同源性：与内源性蛋白比对，同源性≥85%为低风险
• 聚集程度：浊度法（A280nm），聚集率≤5%为可接受
• 电荷异质性：毛细管电泳（CE），酸性/碱性峰比例±2%

交叉反应抗体检测：

• 内源性蛋白交叉：Westernblot，与靶蛋白结合强度≥0.5倍阳性对照
• 其他生物药交叉：SPR检测，结合常数（Ka）≥1×10⁵M⁻¹s⁻¹
• 自体抗体影响：类风湿因子（RF）排除试验，RF阳性样本需校正

生物标志物相关性分析：

• ADA与疗效：Pearson相关性分析，R²≥0.7为强相关
• 细胞因子与不良反应：Logistic回归分析，OR值≥2为风险因素
• 免疫复合物与毒性：ROC曲线分析，AUC≥0.8为有效预测指标

检测范围

1.治疗性单克隆抗体（mAb）：涵盖IgG1-IgG4亚型，重点检测ADA滴度、中和活性及IgG亚类分布，评估长期用药的免疫原性累积风险

2.重组蛋白药物：包括胰岛素、生长激素、干扰素等，侧重分析免疫复合物形成、补体激活及细胞因子谱变化，揭示免疫介导的不良反应机制

3.基因治疗载体：涵盖腺病毒、慢病毒、AAV等载体，重点评估针对载体的中和抗体水平及T细胞免疫反应，预测载体重复给药的有效性

4.疫苗（灭活/减毒/重组）：包括新冠疫苗、HPV疫苗等，侧重检测中和抗体滴度（如中和效价≥1:40为保护阈值）及T细胞增殖反应，评价疫苗免疫原性及保护力

5.细胞治疗产品（CAR-T/干细胞）：涵盖自体/异体CAR-T细胞、间充质干细胞，重点监测移植物抗宿主病（GVHD）相关细胞因子（如IL-2、IFN-γ）及针对CAR结构的抗体反应

6.生物类似药：对比原研药与仿制药的免疫原性差异，重点检测ADA阳性率、中和抗体比例及免疫复合物浓度，确保生物类似药的安全性与有效性一致性

7.多肽药物：包括GLP-1受体激动剂、催产素等，侧重鉴定B细胞表位及交叉反应抗体，评估多肽片段的免疫原性潜能

8.Antibody-drugconjugate（ADC）：重点分析抗体部分的免疫原性（如ADA）及细胞毒素释放后的免疫反应，监测ADC诱导的细胞因子风暴风险

9.基因编辑产品：涵盖CRISPR/Cas9、碱基编辑器等，重点检测针对编辑工具（如Cas9蛋白）的抗体反应及T细胞免疫激活，评估基因编辑的安全性

10.新型疫苗（mRNA/病毒载体）：包括mRNA新冠疫苗、腺病毒载体疫苗，侧重评估mRNA的免疫原性（如TNF-α、IL-6升高水平）及中和抗体持续时间，指导疫苗接种策略

检测方法

国际标准：

• ICHQ6B生物制品的质量标准（规定生物制品免疫原性评价的通用框架，包括抗体检测方法的验证参数：特异性、灵敏度、精密度）
• FDAGuidanceforIndustry:ImmunogenicityAssessmentforTherapeuticProteinProducts（详细要求ADA检测的临界值确定（如95%置信区间）、中和抗体的功能活性验证）
• EMAGuidelineontheImmunogenicityAssessmentofBiotechnologicalMedicinalProducts（强调免疫原性风险评估需结合药物结构（如Fc段修饰）及临床背景（如患者人群））

国家标准：

• GB/T39719-2020治疗性单克隆抗体类药物免疫原性评价技术指导原则（增加生物类似药与原研药的免疫原性对比研究要求，包括抗体滴度、亲和力的等效性检验）
• GB/T40226-2021生物类似药免疫原性比较研究技术指导原则（规定生物类似药免疫原性研究的试验设计：平行对照、随机化，数据统计采用等效性检验（如两单侧t检验））
• 《生物制品注册管理办法》（国家药监局第28号令，要求免疫原性研究作为生物制品申报的必备资料，需提交方法学验证报告及临床样本检测数据）

国际标准中，ICHQ6B注重通用性，FDA指南侧重临床样本处理及方法验证的细节，EMA指南强调风险评估的综合性；国家标准中，GB/T39719与GB/T40226针对生物类似药的免疫原性研究，补充了等效性检验及交叉反应抗体检测的具体要求，更贴合中国生物类似药的申报需求。

检测设备

1.全自动酶免分析仪：雅培Architecti2000SR（检测速度400测试/小时，光学分辨率0.001OD，CV≤5%）

2.流式细胞仪：BDFACSAriaIII（18色荧光检测通道，灵敏度<100荧光分子/细胞，分选纯度≥98%）

3.表面等离子体共振仪：瑞典BiacoreT200（亲和力检测范围10⁻³-10⁻¹²M，流速1-100μL/min，温度控制精度±0.1℃）

4.多功能微孔板reader：珀金埃尔默EnVision（支持荧光、化学发光、吸光度检测，检测限<1pg/mLfor化学发光）

5.液相色谱-质谱联用仪：安捷伦1290InfinityII+6495TripleQuad（液相部分：流速0.1-5mL/min，柱温范围4-80℃；质谱部分：分辨率10,000，检测限5pg/mL）

6.实时荧光定量PCR仪：罗氏LightCycler480II（荧光通道：FAM、VIC、ROX、Cy5，灵敏度10copies/μL，扩增效率90%-110%）

7.细胞成像系统：赛默飞EVOSM5000（物镜：4×、10×、20×、40×，数字变焦8×，荧光通道：DAPI、GFP、RFP、Cy5）

8.激光共聚焦显微镜：蔡司LSM880（分辨率120nm，扫描速度8fps，支持多光子成像）

9.质谱流式细胞仪：FluidigmCyTOFXT（检测参数≥40个金属标签，灵敏度<100molecules/cell，样本throughput：96样本/run）

10.自动样本处理系统：TecanFreedomEVO（处理能力：1000样本/天，误差率<0.1%，支持ELISA、PCR等试验的样本分配）

11.超微量分光光度计：赛默飞NanoDropOneC（检测范围2-1500ng/μLforDNA/RNA，波长范围200-800nm，无需稀释）

12.低温高速离心机：贝克曼库尔特AvantiJ-E（最大转速100,000×g，温度范围-20℃-40℃，容量：6×50mLrotor）

13.生物传感器：FortéBioOctetRED96（检测技术：生物层干涉法（BLI），亲和力范围10⁻³-10⁻¹²M，检测时间<10分钟/样本）

14.自动染色仪：徕卡Bond-Max（处理能力：200slides/天，染色一致性：CV≤3%，支持免疫组化、原位杂交）

15.质谱鉴定系统：布鲁克timsTOFPro2（分辨率≥200,000FWHM，扫描速度120Hz，灵敏度<1fmolfor蛋白质鉴定）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"临床用药免疫原性研究"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。