乳酸链球菌素发酵过程测试

检测项目

1.pH值监测：发酵液pH范围3.5-4.5，允许偏差±0.2，实时监测频率每分钟，电极校准每日使用pH4.0和7.0缓冲液

2.温度控制：培养温度30-37°C，波动±0.5°C，热敏电阻精度±0.1°C，记录间隔10秒，加热套功率可调

3.溶解氧浓度：DO值2-8mg/L，监测频率每小时，电极响应时间<30秒，校准空气饱和点100%，线性误差±1%

4.生物量测定：光密度OD600，范围0.1-10，线性相关系数R²≥0.99，取样稀释倍数1-100，比色皿光径10mm

5.Nisin产量：高效液相色谱法测定，浓度50-500mg/L，保留时间10-15分钟，柱温30°C，流动相乙腈-水（30:70），检测波长220nm

6.糖类消耗：葡萄糖浓度初始20g/L，残糖<1g/L，HPLC分析精度±0.1g/L，使用RI检测器，柱温35°C

7.氨基酸含量：关键氨基酸如赖氨酸、缬氨酸，HPLC分析，浓度0.5-5g/L，衍生化OPA试剂，荧光检测Ex340nm/Em455nm

8.微生物污染：总菌落计数，CFU/mL应<10²，平板计数法，培养基PCA，incubation30°C48小时，计数精度±5%

9.酶活性检测：蛋白酶活性，U/mL，测定方法福林酚法，底物酪蛋白1%，反应时间30分钟，标准曲线R²≥0.99

10.发酵时间：总发酵时间24-48小时，时间控制精度±0.5小时，从接种到收获，基于OD600和产物曲线

11.泡沫控制：消泡剂添加量0.1-0.5%，视觉监测无溢出，泡沫高度<5cm，压力传感器监测罐压0-0.5bar

12.粘度测定：发酵液粘度1-5cP，旋转粘度计测量，spindleLV1,转速60rpm，温度控制25°C，误差±0.1cP

13.代谢产物分析：乳酸浓度5-20g/L，HPLC测定，流动相磷酸盐缓冲液，检测波长210nm，保留时间5分钟

14.菌体形态观察：显微镜检查，放大倍数400x，菌体大小0.5-1.0μm，形态一致性≥95%，无异常形态

15.气体排放监测：CO2释放率0.1-0.5L/L/h，红外传感器精度±0.01%，数据记录每分钟

检测范围

1.实验室摇瓶发酵样品：体积100-500mL，摇床速度150-250rpm，温度控制±1°C，用于初步工艺优化和菌株筛选

2.小型发酵罐样品：容积5L-50L，不锈钢316L材质，集成pH、温度、DO传感器，检测参数一致性和scalability

3.工业规模发酵罐样品：容积1000L以上，碳钢或不锈钢，搅拌功率0.5-5kW，关注放大效应、混合效率和热传递稳定性

4.纯化Nisin产品：粉末或液体形式，纯度≥95%，检测杂质如盐分<1%、水分<5%，效价单位IU/mg，最小1000IU/mg

5.发酵过程不同阶段样品：接种后0小时、对数期（8-12小时）、稳定期（24小时），动态监测生长曲线、产物合成速率和代谢变化

6.不同乳酸链球菌菌株的发酵液：野生型或突变株，如Lactococcuslactissubsp.lactis，比较产量差异±10%、生长速率0.1-0.3h⁻¹和遗传稳定性

7.优化培养基配方的测试样品：碳源（葡萄糖、乳糖10-50g/L）、氮源（酵母提取物、peptone5-20g/L），评估生长曲线、产物得率0.1-0.5g/g和成本效率

8.环境控制样品：无菌空气（过滤效率99.99%、颗粒<0.2μm）、水（电阻率18.2MΩ·cm）、设备表面（擦拭取样面积10cm²），微生物监控频率每日

9.质量控制参考样品：标准品NisinA（浓度100-1000mg/L），加标样品用于方法验证，回收率85-115%，相对标准偏差<5%

10.最终食品添加剂产品：符合GB2760食品安全标准，检测残留溶剂（乙醇<0.5%、乙酸乙酯<0.1%）、重金属（铅<2mg/kg、砷<1mg/kg）和微生物限值

11.发酵废液：处理后排放样品，COD<100mg/L,BOD<30mg/L,总氮<10mg/L,环保指标检测频率每周

12.中间产物：如细胞裂解液（蛋白浓度10-50g/L）、离心上清（澄清度NTU<5），用于下游处理测试，活性保留≥90%

13.种子液样品：接种前菌液，OD6000.5-2.0，活力≥95%，无污染，用于扩大培养一致性验证

14.添加剂和诱导剂样品：如CaCl₂添加量0.1-0.5%，诱导剂浓度0.01-0.1mM，检测对发酵影响的剂量响应

15.稳定性测试样品：长期储存产品，温度4-25°C，时间0-12个月，检测效价下降率<10%/年，物理稳定性无沉淀

检测方法

国际标准：

ISO15214:1998Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Horizontalmethodfortheenumerationofmesophiliclacticacidbacteria—Colony-counttechniqueat30degreesC

ASTME691-22JianCePracticeforConductinganInterlaboratoryStudytoDeterminethePrecisionofaTestMethod

ISO6887-1:2017Microbiologyofthefoodchain—Preparationoftestsamples,initialsuspensionanddecimaldilutionsformicrobiologicalexamination

ISO13859:2014Soilquality—Determinationofpolycyclicaromatichydrocarbons(PAH)byhighperformanceliquidchromatography(HPLC)—Adaptedforpeptideanalysiswithvalidation

ASTMD1293-18JianCeTestMethodsforpHofWater

ISO7346:1996Waterquality—Determinationoftheacutelethaltoxicityofsubstancestoafreshwaterfish—Foreffluenttoxicitytestinginwastesamples

ISO21527:2008Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Horizontalmethodfortheenumerationofyeastsandmoulds

ASTME1941-10JianCeTestMethodforDeterminationofCarboninRefractoryandReactiveMetalsandTheirAlloysbyCombustionAnalysis—Forcarbonsourcequantificationinmedia

ISO1183-1:2019Plastics—Methodsfordeterminingthedensityofnon-cellularplastics—Appliedtofermentationbrothdensitymeasurement

ASTME1085-22JianCeTestMethodforAnalysisofAluminumandAluminumAlloysbySparkAtomicEmissionSpectrometry—Forelementalanalysisinmediacomponents

ISO20483:2013Cerealsandpulses—Determinationofthenitrogencontentandcalculationofthecrudeproteincontent—Kjeldahlmethod

ISO6579-1:2017Microbiologyofthefoodchain—Horizontalmethodforthedetection,enumerationandserotypingofSalmonella

国家标准：

GB/T4789.2-2016食品微生物学检验菌落总数测定

GB/T5009.75-2016食品添加剂中铅的测定

GB/T601-2016化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T23527-2009蛋白酶活力测定方法

GB/T16285-1996食品中葡萄糖的测定酶电极法

GB/T21915-2008食品中pH值的测定

GB/T5009.8-2016食品中蔗糖的测定

GB/T20380-2006淀粉及其制品中氮含量的测定

GB/T13025-2008制盐工业通用试验方法

GB/T14457.2-2013香料乙醇含量的测定

GB/T5009.11-2014食品中总砷及无机砷的测定

GB/T5009.12-2017食品中铅的测定

GB/T4789.15-2016食品微生物学检验霉菌和酵母计数

检测设备

1.pH计：型号pH-210,精度±0.01,自动温度补偿范围0-100°C,电极寿命6个月,数据输出RS232

2.温度传感器：型号TempProbe-100,PT100传感器，范围-50to150°C,精度±0.1°C,IP67防护,响应时间<5秒

3.高效液相色谱系统：型号HPLC-600,withdiodearraydetector,流速0.1-10mL/min,柱温箱控制20-40°C±0.1°C,自动进样器容量100位,用于Nisin定量和杂质分析

4.紫外可见分光光度计：型号UVSpec-550,wavelengthrange190-1100nm,bandwidth2nm,光度精度±0.002A,用于OD600measurementandspectrumscanning,cuvetteholderthermostated

5.发酵罐系统：型号BioFerm-2000,容积5L-50L,集成pH、温度、DO控制,搅拌速度50-1000rpm±1rpm,自动消泡基于电容传感器,数据记录每秒

6.微生物培养箱：型号Incub-360,temperaturecontrol4-60°C±0.5°C,withhumiditycontrol30-95%RH±3%,CO2控制0-20%,用于平板培养和摇瓶实验

7.分析天平：型号Balance-0.001g,maximumcapacity200g,precision0.001g,internalcalibration,防风罩,单位切换g/mg

8.离心机：型号Centri-4000,maxspeed4000rpm±10rpm,capacity6x100mL,温度控制-10to40°C±1°C,加速度9.8m/s²,用于细胞收获

9.无菌操作台：型号Laminar-100,HEPAfilter,class100cleanliness,风速0.45m/s±0.05m/s,工作区尺寸0.9mx0.6m,UV灯杀菌30分钟

10.数据记录仪：型号DataLog-500,16通道，采样率1Hzto1kHz,communicationRS485/USB,forreal-timedataacquisitionandstorage,软件分析趋势

11.旋转粘度计：型号Visco-300,范围1-10000cP,精度±1%,spindlesetLV1-LV4,温度探头PT100,用于发酵液流变特性

12.显微镜：型号Micro-400,放大倍数40x-1000x,数码相机5MP,软件图像分析,用于菌体形态和计数

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"乳酸链球菌素发酵过程测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检检测技术研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。