检测项目
1.病毒核酸检测：采用RT-qPCR技术检测CSBV/TSBV特异性基因片段（如RdRp基因），扩增条件为95℃预变性5min，95℃30s/55℃30s/72℃30s共40循环
2.衣壳蛋白抗原检测：ELISA法测定VP1蛋白浓度（波长450nm/630nm双波长读取）
3.幼虫组织病理学检验：石蜡切片HE染色观察中肠上皮细胞空泡化程度（显微成像分辨率≥400）
4.病毒分离培养：SPF级蜜蜂幼虫体内接种（温度340.5℃，湿度70%5%）
5.抗体效价测定：间接免疫荧光法测定血清IgG滴度（效价≥1:64判为阳性）
检测范围
1.患病幼虫尸体（采集日龄4-5日龄典型症状样本）
2.成年工蜂体表携带物（包括口器分泌物及足部附着物）
3.蜂王浆原料（每批次抽取500g进行病毒筛查）
4.蜂箱内壁残留物（刮取面积≥10cm的蜡屑混合物）
5.花粉饲料（研磨过100目筛后制备悬液）
检测方法
1.GB/T22915-2008《蜜蜂检疫技术规范》幼虫病检疫流程
2.SN/T3973-2014《蜜蜂囊状幼虫病检疫鉴定规范》病毒分离标准
3.ISO21418:2020《蜜蜂病毒分子检测通用要求》核酸提取质控标准
4.OIE《陆生动物诊断试验手册》第3.8.1章病毒培养规程
5.ASTME3066-16《昆虫病原体分子检测标准指南》qPCR验证程序
检测设备
1.ABIQuantStudio7Pro实时荧光定量PCR仪（支持TaqMan探针法）
2.ThermoMultiskanFC酶标仪（含病原体检测专用滤光片组）
3.LeicaDM500生物显微镜（配置病理图像分析系统）
4.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机（最大转速30,000rpm）
5.MemmertIPP400培养箱（温度波动度0.3℃）
6.MilestoneETHOSX微波组织处理仪（快速石蜡包埋系统）
7.Bio-RadChemiDocMP成像系统（化学发光信号捕获）
8.SartoriusCP225D电子天平（称量精度0.01mg）
9.EscoAirstreamClassII生物安全柜（HEPA过滤效率99.99%）
10.PanasonicMCO-170AICCO₂培养箱（病毒分离专用模块）