检测项目
病原菌分离培养:采用NA培养基(Nutrient Agar),培养温度28±1℃,观察48小时菌落形态
PCR分子鉴定:靶向基因Xoo-16S rRNA(引物序列F:5'-CAGCMGCCGCGGTAAT-3';R:5'-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3')
抗药性基因筛查:检测qnrS1、gyrA突变位点(D87G/Y)及acrB基因表达量
毒素活性测定:黄单胞菌素(Xanthomonadin)浓度检测(HPLC法),检出限0.1μg/mL
环境适应性分析:pH耐受范围(4.0-9.5)、盐浓度耐受梯度(0-3% NaCl)
检测范围
水稻种子样本:表面消毒后提取胚乳组织
染病叶片组织:选取典型水渍状病斑区域
农田灌溉水样:过滤浓缩100mL样本
土壤微生物群落:根际土取样深度0-20cm
农药残留物:重点检测噻菌铜、叶枯唑等制剂代谢产物
检测方法
国际标准:ISO 16140-6:2019(微生物分子检测验证规程)
国家标准:GB/T 28084-2011(水稻细菌性条斑病菌检疫鉴定)
行业规范:NY/T 1480-2018(水稻病害田间调查技术规范)
分子检测:实时荧光定量PCR(SYBR Green I法),扩增效率要求90-110%
生化鉴定:API 20NE系统(生物梅里埃公司)进行碳源利用试验
检测设备
全自动微生物鉴定系统:VITEK 2 Compact(生物梅里埃),支持450种生化反应
实时荧光定量PCR仪:Bio-Rad CFX96 Touch™,温度均一性±0.2℃
高效液相色谱仪:Agilent 1260 Infinity II,配备DAD检测器(波长范围190-950nm)
超净工作台:ESCO AC2-4S1(HEPA过滤效率99.99%)
荧光显微镜:Olympus BX53(配备DP80双摄像头系统),支持400×油镜观察