全身性土拉菌病检测

检测项目

血清学检测：

• 间接荧光抗体试验：IgM抗体效价（稀释度≥1:80），IgG抗体效价（参照WHO指南）
• 酶联免疫吸附试验：抗原结合率（≥90%阳性率），交叉反应排除（非特异性结合≤5%）
• 凝集试验：凝集滴度（标准值≥1:160，参照CDC协议）

分子生物学检测：

• 实时荧光定量PCR：靶基因拷贝数（检测限10拷贝/μL），熔解曲线分析（Tm值65±2℃）
• 多重PCR：扩增子大小（预期片段100-500bp），特异性验证（引物效率≥95%）
• 核酸杂交：信号强度阈值（信噪比≥3），杂交温度（42±1℃）

微生物培养检测：

• 血琼脂培养：菌落特征观察（直径1-2mm），生长周期（24-48小时）
• 选择培养基分离：抑制杂菌率（≥99%），氧化酶反应阴性
• 生化鉴定：糖发酵试验（葡萄糖阳性），触酶活性（弱阳性）

抗原检测：

• 免疫层析试验：检测线显色（阈值浓度0.1ng/mL），反应时间（10分钟内）
• 免疫荧光：荧光强度（相对单位≥50），背景噪音控制（≤5%）
• 蛋白印迹：条带特异性（分子量17kDa/43kDa），假阳性率（≤2%）

药敏试验：

• 琼脂扩散法：抑菌圈直径（≥15mm敏感），参考值（CLSIM100）
• 微量肉汤稀释：MIC值（范围0.03-4μg/mL），终点判定（80%抑制）
• 药敏谱分析：耐药基因检出（如gyrA突变），敏感性分级标准

病理学检测：

• 组织染色：革兰氏染色阴性，吉姆萨染色特性
• 组织切片分析：肉芽肿病变评分（0-3级），炎症细胞浸润程度
• 免疫组化：抗原定位（胞内分布），染色强度（阳性细胞≥10%）

环境样本检测：

• 水样富集：浓缩倍数（100倍），回收率（≥70%）
• 土壤提取：DNA提取纯度（A260/A280≥1.8），抑制剂去除率（≥90%）
• 气溶胶采样：颗粒物捕获效率（≥95%），存活率测定

质量控制：

• 阴性阳性对照：符合率（≥98%），批次变异系数（≤10%）
• 精密度测试：RSD值（≤5%），重复性验证
• 标准物质校准：浓度梯度（1-1000CFU/mL），偏差范围（±5%）

生物安全检测：

• 灭活验证：活菌残留（阴性），处理温度（70℃/30分钟）
• 防护评估：气溶胶泄漏测试（≤0.1μm颗粒），生物安全柜流量（0.5m/s）
• 废弃物处理：消毒效率（log4减少），处理时间标准

分型鉴定：

• 脉冲场凝胶电泳：条带模式分析（相似度≥90%），分型标准
• 多基因测序：SNP位点识别（精确度≥99.9%），参考数据库
• 质谱分型：蛋白峰识别（m/z5000-20000），匹配阈值

检测范围

1.血清样本：涵盖急性期及恢复期血清，检测重点为抗体动态变化和血清转换速率

2.全血样本：包括EDTA抗凝全血，检测重点为病原体核酸载量及白细胞吞噬分析

3.组织样本：如肝脏、脾脏活检组织，检测重点为细菌负荷量及组织病理损伤评分

4.痰液及支气管灌洗液：呼吸道分泌物样本，检测重点为细菌培养阳性率及PCR扩增效率

5.淋巴液样本：淋巴结穿刺液，检测重点为细菌扩散程度及局部免疫应答

6.水源样本：地表水及饮用水，检测重点为细菌存活率及过滤浓缩效果

7.土壤样本：环境土壤及尘埃，检测重点为细菌分布密度及季节性变异

8.气溶胶样本：空气采集样本，检测重点为粒径分布及感染风险评估

9.动物组织样本：啮齿类及兔类宿主组织，检测重点为跨物种传播及病原体变异

10.生物制品样本：疫苗及诊断试剂，检测重点为无菌保证及效力验证

检测方法

国际标准：

• ISO15189:2022医学实验室质量管理规范
• CLSIM100-ED32抗菌剂敏感性试验执行标准
• WHOLaboratoryBiosafetyManual4th病原体处理指南
• FDABacteriologicalAnalyticalManualChap.18细菌检测方法
• EUCAST10.0药敏试验标准

国家标准：

• GB/T4789.28-2023食品微生物检验通则
• GB/T38502-2020病原微生物实验室生物安全通用准则
• GB/T34789-2017核酸提取纯化方法
• GB/T34224-2017免疫测定试剂盒技术要求
• GB/T20469-2006临床实验室血清学检验标准

国际标准侧重风险评估和全球适用性（如ISO15189强调持续改进），国家标准则注重本地化参数（如GB/T规定了具体样本处理温度和时间差异）。

检测设备

1.实时荧光定量PCR系统：CFX96型（检测通道6个，温控精度±0.1℃）

2.酶标仪：SpectraMaxM5型（波长范围200-1000nm，吸光度精度±2%）

3.生物安全柜：ClassIIA2型（风速0.3-0.5m/s，HEPA过滤效率99.99%）

4.微生物培养箱：ThermoScientificHeratherm型（温度范围4-65℃，均匀度±0.5℃）

5.离心机：Eppendorf5430R型（转速100-15000rpm，制冷温度-10℃）

6.核酸提取仪：QIAcubeHT型（通量96样本/h，提取效率≥95%）

7.荧光显微镜：OlympusBX53型（放大倍数40-1000x，荧光滤光片组）

8.电泳系统：Bio-RadPowerPac型（电压10-300V，凝胶尺寸10x10cm）

9.自动微生物鉴定系统：VITEK2型（鉴定数据库>500种，准确率≥98%）

10.液氮罐：ChartMVE型（存储温度-196℃，容量50L）

11.培养摇床：Innova44型（转速30-300rpm，温控范围5-80℃）

12.流式细胞仪：BDAccuriC6型（检测速率10000事件/s，激光波长488nm）

13.HPLC系统：Agilent1260型（流速0.1-10mL/min，检测限0.01ng）

14.超低温冰箱：ThermoScientificJianCeT型（温度-80℃，均匀度±3℃）

15.气溶胶采样器：SKCBioSampler型（流量12.5L/min，粒径捕获

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"全身性土拉菌病检测"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。