检测项目

1. 病原体核酸检测：采用Real-time PCR检测Borrelia recurrentis特异性基因片段（glpQ基因引物序列：F:5'-CAGCAAGTGTTCAAGGTG-3'；R:5'-GCTTCAGCCTCTTCATCC-3'），扩增条件：95℃预变性5min→(95℃ 30s→60℃ 30s→72℃ 45s)×40循环

2. 血清学抗体检测：ELISA法测定IgM/IgG抗体效价（抗原包被浓度2.5μg/mL），临界值判定：OD450≥0.6为阳性

3. 血涂片镜检：吉姆萨染色后油镜观察（100×物镜），阳性标准：每视野≥3条螺旋体（长度8-30μm）

4. 动物接种试验：豚鼠皮下接种0.5mL待检血液（接种后每日体温监测≥14天），发热期采血验证螺旋体增殖

5. 药敏试验：微量肉汤稀释法测定青霉素G/MIC值（浓度梯度0.008-8μg/mL），培养温度33℃±1℃，判定标准参照CLSI M45-A3

检测范围

1. 临床样本：急性期患者全血（EDTA抗凝）、血清（分离后-80℃保存）、脑脊液（采样量≥1mL）

2. 媒介虱样本：体虱（Pediculus humanus）中肠组织研磨液（采集后24h内处理）

3. 环境样本：疫区床铺织物纤维（采样面积10cm×10cm）、土壤标本（深度0-5cm）

4. 实验动物：接种后豚鼠肝脾组织悬液（研磨后过200目筛网）

5. 疫苗研发样品：灭活病原体悬液（甲醛终浓度0.4%）、重组蛋白抗原（纯度≥95%）

检测方法

ISO 15189:2012《医学实验室质量和能力要求》分子生物学检测程序

GB/T 40982-2021《病原微生物实验室生物安全通用准则》BSL-3实验室操作规范

ASTM E2276-19《体外诊断试剂性能评价标准》血清学试剂盒验证方案

WS/T 563-2017《回归热诊断标准》临床病例确诊流程

GB 19489-2008《实验室生物安全通用要求》样本灭活处理规程

检测设备

ABI 7500实时荧光定量PCR仪（Thermo Fisher）：支持TaqMan探针法多重检测，温控精度±0.1℃

Olympus BX53荧光显微镜（Evident）：配备100×油镜及LED冷光源系统

BioTek ELx808酶标仪（Agilent）：波长范围340-850nm，分辨率0.001 OD

Heracell 150i CO2培养箱（Thermo Scientific）：温度控制±0.2℃，CO2浓度波动≤0.1%

Allegra X-15R离心机（Beckman Coulter）：最大转速15,000rpm，配备生物安全密封转子

MB3600全自动血培养系统（BACTEC）：支持需氧/厌氧双模式培养瓶监测

Sartorius纯水系统（arium® pro VF）：产水电阻率18.2 MΩ·cm@25℃

Labconco Class II生物安全柜（A2型）：前窗风速0.51m/s±20%，HEPA过滤效率99.99%

Cryomed 7401程序降温仪（Thermo）：降温速率0.1-50℃/min可调

Sysmex XN-1000血液分析仪：白细胞分类计数精度CV≤3%