检测项目
1.病原菌形态学鉴定：菌丝直径0.8-1.5μm，分生孢子尺寸12-183.5-4.5μm
2.孢子悬浮液浓度测定：单位体积孢子数≥10^4CFU/mL
3.抗药性基因筛查：β-tubulin基因突变位点E198A/F200Y
4.致病力分级测试：接种后病斑扩展速率0.5-2.3mm/d
5.生理生化指标分析：过氧化物酶活性≥35U/mgprot
检测范围
1.1-2年生落叶松实生苗茎段样本
2.育苗基质pH值6.0-7.5的土壤样本
3.带菌种子千粒重≥8.5g的种质材料
4.发病区枯梢组织含水量≤40%的病残体
5.苗圃灌溉水样总菌落数≥300CFU/mL
检测方法
ISO17025:2017《真菌分离培养通用技术规范》
GB/T35343-2017《松枯梢病检疫鉴定方法》
ASTMD7788-14《植物病原真菌分子检测标准指南》
LY/T2378-2014《林木种苗病害检测规程》
SN/T1809-2006《进出境植物病原真菌检疫规范》
检测设备
OlympusBX53荧光显微镜：400-1000病原形态观察
Bio-RadT100PCR仪：β-tubulin基因扩增程序94℃/30s→55℃/30s→72℃/1min
Eppendorf5430R高速离心机：12000rpm孢子沉淀分离
ThermoNanoDrop2000分光光度计：DNA纯度OD260/280≥1.8测定
MemmertICP800恒温培养箱：251℃黑暗培养7d
BurkardVolumetricSporeSampler：24h连续孢子捕捉量程0-9000个/m
BioTekSynergyH1酶标仪：450nm波长抗药性EC50值测定
ESCOAC2-4S1超净工作台：ISO5级洁净度样品处理