检测项目

1.病原菌形态学鉴定:孢子囊直径(14-20μm)、卵孢子壁厚(1.5-3μm)、孢囊梗长度(25-50μm)

2.分子生物学检测:ITS序列比对(GenBank登录号KF766190)、β-tubulin基因扩增

3.生理生化特性分析:最适生长温度(18-22℃)、pH耐受范围(5.5-7.0)、孢子萌发率(≥85%)

4.寄主特异性测试:对甘蓝/花椰菜/芥菜的侵染能力分级(0-4级)

5.抗药性监测:甲霜灵EC50值测定(0.05-1.2μg/mL)、嘧菌酯敏感性测试

检测范围

1.甘蓝幼苗期至成熟期全株样本

2.十字花科种子检疫(含水量≤8%)

3.田间病叶样本(病斑直径≥2mm)

4.土壤残留菌源检测(孢子密度≥10/g)

5.农用器械表面微生物污染筛查

检测方法

1.ISO21458:2009《植物病原卵菌分子检测技术规范》

2.GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定》

3.ASTMD8083-16《植物病原菌实时荧光定量PCR标准方法》

4.NY/T401-2000《蔬菜种子产地检疫规程》

5.GB/T36837-2018《植物病原卵菌分离培养技术规范》

检测设备

1.OlympusBX53显微镜:配备DP27成像系统(1000油镜观察孢子结构)

2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪:TaqMan探针法基因扩增

3.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机:最大转速30,000rpm(核酸提取)

4.MemmertIPP110培养箱:温度控制精度0.1℃(病原菌培养)

5.IlluminaMiSeq测序平台:PE300双端测序(全基因组分析)

6.SartoriusCP225D电子天平:0.01mg精度(药剂称量)

7.LeicaCM1950冷冻切片机:-30℃低温切片(组织病理学观察)

8.BioTekSynergyH1酶标仪:OD600吸光度测定(菌丝生物量分析)

9.ZeissAxioZoom.V16体视显微镜:50放大倍率(病斑形态观察)

10.MettlerToledoSevenExcellencepH计:0.001精度(培养基配制)